检测血液或尿液中甲基丙二酸含量的方法

摘要

本发明公开了一种检测血液或尿液中甲基丙二酸含量的方法，包括如下步骤：将标品、待测样本分别和内标溶液混匀，加入基质溶液，混匀；加入萃取试剂混匀，离心；取上清液，吹干；加入饱和的酸性醇溶剂，混匀，密封，加热65℃，20min衍生；衍生完成后吹干溶剂；加入流动相复溶液复溶，混匀；超声萃取，混匀，离心；取上清溶液，与流动相一起流经色谱柱进入液相-质谱分析，最终测定血液或尿液中甲基丙二酸的含量。本发明的检测甲基丙二酸含量的方法，简便、快速、准确，不仅可以应用于大量样本筛查，而且定量准确、特异性强。

主权项

一种检测血液中甲基丙二酸含量的方法，包括如下步骤： 步骤1：用移液器移取25μL的浓度为80‑2000μg/L的甲基丙二酸标准溶液和25μL的浓度为240μg/L的同位素内标溶液，所述同位素内标溶液为D₃‑甲基丙二酸，涡旋仪混匀；同时平行移取25μL血清样本和25μL的同位素内标溶液涡旋混匀； 步骤2：向上述混合液中加入450μL基质溶液，所述基质溶液为4％的牛血清蛋白溶液，涡旋混匀； 步骤3：加入1.5mL磷酸化甲基叔丁基醚，充分混匀并高速离心； 步骤4：取部分上清液，于氮吹仪上氮气吹干； 步骤5：加入200μL饱和的盐酸正丁醇溶液，涡旋混匀，密封，加热衍生； 步骤6：衍生完成后再次加热吹干溶剂； 步骤7：加入75μL的复溶液，所述复溶液为含1‰甲酸铵的甲醇水溶液，甲醇的体积百分比为80％，充分混匀； 步骤8：经超声萃取一段时间后，充分混匀并高速离心； 步骤9：取上清溶液，由液相自动进样器进样，经液相色谱柱的色谱分离，经质谱分析，最终定量分析血液中甲基丙二酸的含量； 液相色谱条件：样品经液相的自动进样器进样，流动相组成为乙腈水溶液，所述乙腈水溶液含1‰甲酸铵，梯度洗脱分离，流速200μL/min，进样量10μL，进样前清洗取样针，六通阀设定9‑14min to load；色谱柱：Discovery C18，SUPELCO,HPLC,5cm×2.1mm,5μm； 三重四级杆串联质谱仪条件：ESI离子源，正离子扫描；SRM模式，扫描时间18min，喷雾电压5000V，鞘气为氮气，30psi，辅助气为氮气，10psi，毛细管温度300℃，碰撞气为氩气，1.5mTorr；m/z231→119、m/z231→175作为MMA的特征定性离子对，m/z234→122、m/z234→178作为内标D₃‑MMA的特征定性离子对，m/z231→119用于MMA定量，CE为10eV，扫描时间0.5s，扫描宽度1u。