| 摘要 |
1. Способ размножения стволовых клеток волосяных фолликул в искусственной среде, состоящий из следующих этапов:1) настаивание волосяных фолликул или тканевых блоков волосяных фолликул с использованием протеазы для получения клеток, засевания этих клеток в микроносителях с диапазоном плотности от 1×10клеток/г до 1×10клеток/г с их последующим помещением в жидкую питательную среду,2) перенос микроносителей с клетками во вращающуюся колбу,3) заполнение вращающейся колбы жидкой питательной средой в пропорциях 1/10-1/3 от объема колбы,4) помещение вращающейся колбы в клеточный инкубатор при условиях 37°C, 5 v/v % COи вращение колбы в течение 1-5 минут каждый час со скоростью 10-300 об/мин,5) использование дигестивного агента для выращивания клеток из микроносителей. После получения примерно монослоя клеток в микроносителях выполняется инактивация трипсина с помощью сыворотки и после промывки от сыворотки и антибиотиков с использованием фосфатно-буферного раствора можно собирать увеличенное количество стволовых клеток волосяных фолликул.2. Способ по п.1, где дигестивным агентом является раствор из 0, 25% трипсина и 0, 02% EDTA.3. Способ по п.1, где в качестве жидкой питательной среды используется DMEM, DMM-F12, EGM, KGM, IMDM, MEM или EBM как базальная среда, содержащая комбинацию из одного или нескольких биологических факторов.4. Способ по п.3, где в качестве биологических факторов используется IGF, bFGF, EGF, VEGF, фосфатный витамин C, дексаметазон, инсулин, трансферрин, гипофизарная вытяжка животных, пенициллин-стрептомицин, амфотерицин, человеческая или животная сыворотка.5. Способ по п.4, где в качестве животной сыворотки используется одна или комбинация из к |
