通过组织培养持续获得半夏种苗次生代谢产物的方法

摘要

本发明公开了一种通过组织培养持续获得半夏种苗次生代谢产物的方法，该方法的步骤包括（1）植物体批量获得：将植物体处理后接种入培养用反应器装置中，进行培养参数设定后，进行规模化培养，根据需要进行下一步的操作，所述植物体是指无菌培养下获得的植物细胞、植物组织、植物器官和丛生芽等状态；（2）植物次生代谢产物产生及诱导：将获得的植物体在一定的培养条件下生成或进行诱导以获得需要的次生代谢产物；（3）植物次生代谢产物的收集和提取；植物体为半夏种苗，将半夏块茎取出后，通过研磨，超声提取、真空干燥等步骤得到麻黄碱提取物，通过HPLC方法进行检测，得到所获得的半夏块茎中麻黄碱的含量可达到160.30ug/g。

主权项

一种通过组织培养持续获得半夏种苗次生代谢产物的方法，包括以下步骤：（1）植物体批量获得：将植物体处理后接种入培养用反应器装置中，进行培养参数设定后，进行规模化培养，根据需要进行下一步的操作，所述植物体是指无菌培养下获得的植物细胞、植物组织、植物器官和丛生芽等状态；（2）植物次生代谢产物产生及诱导：将获得的植物体在一定的培养条件下生成或进行诱导以获得需要的次生代谢产物；（3）植物次生代谢产物的收集和提取：根据次生代谢产物存在的部位，以及次生代谢产物的特性进行次生代谢产物的收集提取操作以获得所需；在步骤（1）中，植物体为半夏种苗，半夏种苗的批量获得：所述培养参数主要有，将半夏丛生芽接种入实施例1中所述的装置中，接种密度：60个/L，分开接种3层，每层20个，调整好培养基后进行培养，其中：培养基配方为：Ms+1.5 mg/L 6‑BA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖；培养基pH：5.8；浸没频率：5min/12h，培养条件：光照强度2000 lux，光照时间12 h/d，培养温度25±1℃，培养时间：40d后植物体长满培养容器；在步骤（2）植物次生代谢产物的诱导中：在培养液不必更换的条件下，将获得的足量的植物体及装置通过外加辅助设备控制环境温度达到35 ℃，处理时间15 d后待半夏倒苗后即可得到所要提取次生代谢产物的半夏块茎，利用可拆卸的多层培养网架的特点，取出部分半夏块茎进行次生代谢产物的提取，剩余部分通过更换新鲜的培养基后继续培养以获得更多的提取材料，所述继续培养的参数同步骤（1）中所述；在步骤（3）植物次生代谢产物的收集和提取中：将半夏块茎取出后，通过研磨，超声提取、真空干燥等步骤得到麻黄碱提取物，通过HPLC方法进行检测，得到所获得的半夏块茎中麻黄碱的含量可达到160.30ug/g；所述步骤（1）中的培养用反应器装置包括反应器罐体盖子（3），具有螺纹，与反应器罐体（4）连接，储液罐（8）上部具有螺纹与反应器培养罐体（4）下部密封结合，储液罐盖子（7）具有与储液罐（8）相配合的螺纹可与储液罐（8）密封结合；培养用反应器装置主体直径为20cm，装置主体高度30cm；所述步骤（2）中的多层培养网架（6）为可耐高温高压灭菌材料，网孔大小0.5mm左右以支撑植物体材料并使培养液顺利通过为准，网架之间利用可组装拆卸支柱支撑；网架间距为5cm。