高盐筛选耐盐碱月季植株的方法

摘要

本发明涉及一种高盐筛选耐盐碱月季植株的方法，具体为利用高盐筛选耐盐碱月季的方法得到在青藏高原种植成活的月季。步骤包括：将获得的月季外植体适用的月季外植体栽培基质，诱导出芽组织后用高盐的培养基进行浇灌筛选，得到耐盐碱的月季。维管束较粗的纤维化枝条切成的10厘米的茎段，栽培基质为蛭石、珍珠岩和营养土以10：2：1的比例，用0.5%高锰酸钾消毒，再用0.3%的生根液对基质进行喷洒；高盐筛选指用含不同浓度的氯化钠液体培养基B稀释液浇灌，选取能正常生长的植株。本发明打破了鲜花的生长界限，从基因改良、个体基因型筛选入手，获得5种耐盐碱月季，填补了格尔木没有鲜花的空白。

主权项

高盐筛选耐盐碱月季植株的方法，它包括的步骤： 1）月季外植体栽培基质的配制蛭石、珍珠岩和营养土以5‑10：2：1的质量比例配制基质，并在基质上层压0.5‑1厘米的河沙，用0.2‑ 0.5%高锰酸钾消毒后，再用0.1‑ 0.3%的生根液对基质进行喷洒； 2）月季外植体的制备选取维管束较粗的木质纤维化月季枝条，剪成8‑15cm的茎段，每个茎段留2‑3片叶子，将月季茎段的形态学下端浸入1‑3% 的生根液中浸泡0.5‑1小时，扦插入配制的基质中，并用稀释10倍的液体培养基A进行浇灌，培养两周；3）月季芽组织的诱导和高盐筛选扦插两周后，月季外植体开始有新的芽长出，依次用含不同浓度NaCl的芽组织诱导与生根培养基B进行筛选； 第一～二周，NaCl浓度为6.0‰，培养温度18～26℃，光照12h/d，光照度2000～4000Lx；第三～四周，NaCl浓度为7.0‰，培养温度18～26℃，光照12h/d，光照度2000～4000Lx；第五～六周，NaCl浓度为8.0‰，培养温度18～26℃，光照12h/d，光照度2000～4000Lx；4）筛选后成活月季的移栽选取正常生长的月季植株种植于盐碱花盆，正常管理，成活后移栽到盐碱地，盐碱地pH值8.7‑9.0；总盐量为0.5％‑0.85％，并浇灌稀释100倍的培养基C，实施正常的管理；5）按通用的脯氨酸含量的检测方法，对耐盐碱月季的抗性分子的检测 绘制脯氨酸的标准曲线，曲线方程y=27.015x + 1.7929，R²=0.9936；从筛选的耐盐碱月季中提取得到脯氨酸的提取液，测定其中的脯氨酸的含量，从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量，按下公式计算样品中脯氨酸含量：脯氨酸含量μg·g^－1Fw = [ X × 提取液总量ml] /[样品鲜重g× 测定时提取液用量ml]公式中：X －从标准曲线中查得的脯氨酸含量μg； 6）运输、栽培与移栽： 将批量耐盐碱月季苗按正常条件保温、保湿、避光包装好，直接运输格尔木室内大棚栽培，将成活月季移栽到室外，正常管理；所述的液体培养基A的配方为：MS+ 0.4mg/L 6‑BA+ 0.8 mg/L NAA；所述的培养基B的配方为： MS+1 mg/L 6‑BA+NaCl；所述的培养基C的配方为：MS+ 0.4mg/L 6‑BA+0.8 mg/L NAA+1mg/L IBA。