一种低温高效玉米秸秆降解复合菌系及其应用

摘要

本发明涉及微生物领域，具体公开了一种低温高效玉米秸秆降解复合菌系及其应用。本发明所述复合菌系包括细菌和真菌，所述细菌包括Cellvibrio、Azospira、Arcobacter、Azonexus、Clostridium、Paludibacter菌属，所述真菌包括Lotharella、Trichosporon菌属。本发明以特定组成的菌属为菌源样品，利用与之相适应的培养基，经过富集培养、继代培养、产酶活培养以及玉米秸秆降解培养，筛选驯化出由特定菌属组成的复合菌系，其能够在低温条件下高效降解玉米秸秆，弥补了现有微生物菌剂只能在中高温条件下降解秸秆的缺陷。

主权项

一种低温高效玉米秸秆降解复合菌系，其特征在于，包括细菌和真菌，所述细菌包括Cellvibrio、Azospira、Arcobacter、Azonexus、Clostridium、Paludibacter菌属，所述真菌包括Lotharella、Trichosporon菌属；其经以下步骤筛选驯化获得：步骤1、将包含有Cellvibrio、Azospira、Arcobacter、Azonexus、Clostridium、Paludibacter、Lotharella、Trichosporon菌属的样品，按100g/L的接种量接种到放置有滤纸条的富集培养基中富集培养，所述富集培养基包含5g/L蛋白胨、1g/L酵母提取粉、5g/L氯化钠、5g/L玉米秸秆、2.0g/L CaCO₃、10mL/L土壤浸提液，其余成分为无菌水；步骤2、培养15‑20天至富集培养基颜色变深、滤纸条溃烂，取培养液按5‑10％接种量接种到新鲜的步骤1所述富集培养基中继续富集培养；步骤3、重复3‑4次步骤2，取富集培养后的培养液按5‑10％接种量接种到放置有滤纸条的继代培养基中25℃继代培养，培养至滤纸条黄化断裂时停止并记录滤纸条黄化断裂时间，所述继代培养基包含(NH₄)₂SO₄2.0g/L、K₂HPO₄1.0g/L、MgSO₄·7H₂O0.05g/L、CaCO₃2.0g/L、NaCl0.2g/L、5g/L玉米秸秆，余量为水；步骤4、取继代培养后的培养液按5‑10％接种量接种到新鲜的放置有滤纸条的所述继代培养基中25℃继代培养，培养至滤纸条黄化断裂时停止并记录滤纸条黄化断裂时间；步骤5、重复步骤4至滤纸条黄化断裂时间恒定时，降低继代培养温度1‑2℃，继续按照步骤4方法继代培养；步骤6、继代培养温度降至4℃且滤纸条黄化断裂时间恒定时，取继代培养后的培养液按5‑10％接种量接种到产酶培养基10℃培养，每隔24h测定一次酶活，连续测定12次，选取滤纸酶最高酶活大于1.1U/ml、内切酶最高酶活大于1.7U/ml的复合菌系培养液，所述产酶培养基包含蛋白胨0.5g/L、(NH₄)₂SO₄2.0g/L、K₂HPO₄1.0g/L、尿素0.6g/L、MgSO₄·7H₂O0.05g/L、MnSO₄·7H₂O0.016g/L、ZnSO₄·7H₂O0.017g/L、CaCl₂0.02g/L、NaCl0.2g/L，余量为水；步骤7、将步骤6选取的复合菌系培养液按5‑10％接种量接种到玉米秸秆降解培养基中10℃培养15天，选取玉米秸秆降解率大于23％的复合菌系培养液，即为所述复合菌系，所述玉米秸秆降解培养基包含100g/L玉米秸秆、(NH₄)₂SO₄15g/L、尿素3g/L、蛋白胨3g/L、CaCl₂0.1g/L、MgSO₄·7H₂O5g/L、K₂HPO₄1g/L、NaCl0.1g/L、FeS0₄·7H₂O0.05g/L、MnS0₄·7H₂O0.016g/L、ZnSO₄·7H₂O0.014g/L、CoCl₂0.02g/L，余量为水。