制备细菌核酸指纹特征谱库的方法

摘要

本发明公开了一种制备细菌核酸指纹图谱库的方法，包括PCR扩增、SAP酶消化、转录和核酸酶切、纯化、质谱仪检测等步骤。基于该方法，建立常见细菌的核酸指纹图谱数据库。根据实验产生的质谱特征图谱库，可对待检细菌进行分类与鉴定，结果可广泛运用于细菌分类和鉴定、遗传进化分析、耐药筛选用途以及进出口检验等领域。

主权项

一种得到不同细菌核酸指纹特征谱库的酶切产物，其特征在于所描述酶切产物的制备过程包括如下步骤： (1)PCR反应：使用针对细菌的PCR通用引物SEQ ID No：1和SEQ ID No：2，分别扩增多个细菌的核酸模板，得到含扩增目标区域的PCR产物，所述细菌包括如表1所列的836种细菌； (2)SAP酶消化：用SAP酶处理步骤(1)得到的PCR产物； (3)转录和核酸酶切：使用特定的转录和内切酶，分别在一个反应体系中，对步骤(2)得到的各个细菌的消化产物进行转录和核酸酶切，获得一系列长度不一、丰度不一的核酸片段； (4)纯化：使用树脂处理步骤(3)得到的酶切产物。