一种基于定量PCR技术确定滩涂贝类摄食选择性差异的分析方法

摘要

本发明涉及一种基于定量PCR技术确定滩涂贝类幼体摄食选择性差异的分析方法，通过对某种滩涂贝类投喂一定数量的混合微藻，摄食一段时间后对摄食前后滩涂贝类体内的各微藻进行定量PCR分析，根据各微藻在贝类体内的比例变化确定该滩涂贝类对不同微藻选择性摄食的差异。本发明特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确，避免了由于贝类浮游或稚贝阶段幼体太小，无法用传统光学显微镜对胃含物进行解剖观察的缺陷；也弥补了颗粒计数仪在浑浊水体中，无法将各种无机、有机颗粒跟微藻颗粒区分开，更无法区分开粒度接近的微藻的不足。

主权项

一种基于定量PCR技术确定滩涂贝类摄食选择性差异的分析方法，其特征在于：对某种滩涂贝类投喂一定数量的混合微藻，摄食一段时间后对摄食前后滩涂贝类体内的各微藻进行定量PCR分析，根据各微藻在贝类体内的比例确定该滩涂贝类对不同微藻选择性摄食的差异；其中混合微藻中各饵料微藻比例测定过程为：捣碎收集的混合微藻滤膜样品，通过CTAB法提取其基因组DNA，以提取的DNA为模板，利用5对特异性引物进行荧光定量PCR扩增，同时配以标准品及阴性对照组同步扩增以消除本底干扰;所述的混合微藻采用硅藻门的角毛藻、金藻门的球等鞭金藻、绿色巴夫藻、绿藻门的青岛大扁藻和微绿球藻；所述5对特异性引物是ChaF/ChaR、IsoF/IsoR、PlaF/PlaR、PavF/PavR及NanF/NanR；所述ChaF的寡聚核苷酸序列是5’‑ATGACTTTTCATTGGCGATGGTT‑3’；所述ChaR的寡聚核苷酸序列是5’‑GCCTCTCGGCCAAGGTTTATG‑3’；所述IsoF的寡聚核苷酸序列是5’‑AACCCCCTGTTGGGGCTC‑3’；所述IsoR的寡聚核苷酸序列是5’‑ACCTCTCGGTCAAGGGAGACG‑3’；所述PlaF的寡聚核苷酸序列是5’‑GTTACTCCTACTTTGGTAGGAGGTGAAC‑3’；所述PlaR的寡聚核苷酸序列是5’‑GGACCTCTCGGTCAAGGTTAGG‑3’；所述PavF的寡聚核苷酸序列是5’‑ACCACTGCGTTGCGTGCTT‑3’；所述PavR的寡聚核苷酸序列是5’‑ACACCCCTCGATGCAGGAAG‑3’；所述NanF的寡聚核苷酸序列是5’‑TAATCTTCAACGAGGAATGCCTAG‑3’；所述NanR的寡聚核苷酸序列是5’‑GGTCGCCAATCCGAACACT‑3’。