由人类诱导式全能型干细胞快速引导分化为成熟肝细胞之方法，及其用于治疗肝病之用途

摘要

本发明系关于一种能够有效且快速引导诱导式全能型干细胞(iPS细胞)分化成肝细胞之方法。根据本发明之方法，iPS细胞可在短时间(较佳系少于15天)内分化成功能性肝细胞，所得之肝细胞不仅具有类似成熟肝细胞之基因表现型，且已在小鼠模式中证明，可援救致死的猛爆性肝衰竭。由于本发明之方法能大幅缩减知技术产生功能性肝细胞所需的时间，因此可有效解决等待肝脏移植时病患正常肝功能之维持问题。

主权项

一种引导人类诱导式全能型干细胞(iPS细胞)分化为肝细胞之方法，其包含：(1)诱导前步骤，将人类iPS细胞培养于小鼠胚胎纤维母细胞(MEF)-条件培养液(Dulbecco’s modified Eagle medium[DMEM]/F12培养基补充以剔除血清替代物(knockout serum replacement)、10 ng/mL基本纤维母细胞生长因子、1 mM L-谷氨酸、100 μM非必须胺基酸、100 μM 2-巯基乙醇、50 U/mL青霉素与50 mg/mL链霉素)达约70%舖满；(2)内胚层诱导步骤，将培养基置换成含有100 ng/mL促进素A(activin A)、50 ng/mL Wnt3a与10 ng/mL肝细胞生长因子(HGF)之Roswell Park Memorial Institute/B27培养基，培养3-5天以诱导内胚层形成；(3)肝系细胞诱导步骤，将培养基置换为成肝系诱导培养基(hepatic commitment medium)(剔除[KO]/DMEM，含有20%剔除血清替代物(knockout serum replacement)、1 mM L-谷氨酸、1%非必须胺基酸、0.1 mM 2-巯基乙醇与1%二甲亚碸)，培养4-6天。(4)成熟步骤，将细胞培养于补充以20 ng/mL抑瘤素M(oncostatin M)、0.5 μM地塞米松与50 mg/mL血清补助因子ITS预混合物(胰岛素，转铁蛋白，亚硒酸)之Iscove’s修改的Dulbecco’s培养基(IMDM)中培养5-7天，而产生成熟的类肝细胞。