稳定蛋白和多肽的方法

摘要

修饰且特别是稳定蛋白和多肽的方法，通过该方法将预先确定的氨基酸引入至所述蛋白或多肽的选择位置中以产生一小组突变体。该方法基于以下的前提，即，某些氨基酸在蛋白或多肽的稳定性方面具有关键的作用。然后可以进一步分析生成的突变体的稳定性和/或功能，例如，亲和性。此外，可以组合适当的突变体，以产生进一步优化的蛋白或多肽。另外，提供了被稳定的实例多肽和适当的鉴定和/或分析去稳定或稳定的蛋白或多肽的方法。该方法可用来研究特定氨基酸在蛋白结构和功能中的作用，和用来开发新的或改善的，例如稳定的蛋白和多肽诸如抗体和单可变结构域。

主权项

一种制备具有改善的化学稳定性的多肽的方法，其中所述方法包括以下步骤：a.从亲代多肽生成突变的多肽的文库，其中所述的亲代多肽包括至少一个单可变结构域，并且其中所述亲代多肽在CDR区中具有DS,DG,NG或NS基序，或在具有接近不稳定的N或D的H‑供体基团的表面暴露区中具有DS,DG,NG或NS基序，并且其中所述突变多肽的氨基酸序列以下列的方式被改变：i.用D替换N‑末端E或N‑末端Q；和ii.用A或T替换至少一个易于氧化的M；和iii.用Q或E替换所述DS,DG,NG或NS基序的D或N；b.和筛选所述已生成的文库的具有高亲和性或抗体亲抗原性的多肽，其中所述高亲和性或抗体亲抗原性表示为与其靶分子的解离常数，并且所述解离常数等于或小于100nM；c.和任选地选择一个或几个具有所述高亲和性或抗体亲抗原性的突变多肽。