一种油桐叶片再生植株的方法

摘要

本发明公开了一种油桐叶片再生植株的方法，属于油桐的快繁技术领域。主要通过油桐叶片直接诱导不定芽、继代培养、增殖培养、壮苗培养、生根培养、炼苗移栽等过程，不仅为快速繁殖优良油桐植株提供了一条途径，而且为以后通过基因工程的方法改良油桐的抗性、提高油桐产量及油质质量等性状，以及为油桐遗传体系的建立打下坚实的基础。

主权项

一种油桐叶片再生植株的方法，其特征在于，包括以下步骤：将油桐无菌苗叶片，在无菌条件下切成面积为0.5‑1cm²的叶盘，接种到1/2MS+1.0‑3.0mg/L6‑BA+0.05‑0.1mg/L IAA+0.05‑0.1mg/L IBA的培养基中诱导不定芽，暗培养3‑5天后，在光照条件下培养20‑30天，培养温度为26士1℃，光照强度为1800‑2000lx，光照时间14‑16h/d；然后经过继代、增殖、壮苗和生根培养获得完整植株；最后进行炼苗、移栽；所述的油桐无菌苗的获得过程如下：选取成熟的油桐当年生种子，取其种皮，将种仁用自来水冲洗3‑5min，然后浸泡20‑30h，中间换水2‑3次，然后在超净工作台中用0.1％的HgCl₂消毒3‑5min，用无菌水冲洗4‑6次，接种在1/2MS基本培养基中，暗培养2‑3天，再转到光照条件下培养15‑20天即可成苗，培养温度为26士1℃，光照强度为1800‑2000lx，光照时间14‑16h/d；继代培养的具体过程如下：将叶盘诱导的不定芽切下接种到1/2MS+1.0‑3.0mg/L6‑BA+0.05‑0.1mg/L IBA的培养基中进行不定芽的继代培养，暗培养1‑3天后，在光照条件下培养15‑25天；培养温度为26士1℃，光照强度为1800‑2000lx，光照时间14‑16h/d；增殖培养的具体过程如下：将继代培养得到的不定芽切下接种到MS+2.0‑3.0mg/L6‑BA+0.05‑0.1mg/L IBA的培养基中进行不定芽的增殖培养，暗培养1‑3天后，在光照条件下培养25‑30天；培养温度为26士1℃，光照强度为1800‑2000lx，光照时间14‑16h/d；壮苗培养的具体过程如下：将增殖培养得到的芽转接到MS+0.3‑1.0mg/L6‑BA+0.5‑1.0mg/L NAA的培养基中进行壮苗培养，暗培养1‑3天后，在光照条件下培养20‑25天；培养温度为26士1℃，光照强度为1800‑2000lx，光照时间14‑16h/d；生根培养的具体过程如下：将增殖培养获得2‑4cm的苗接到1/2MS+0.05‑0.3mg/LIBA的培养基中进行生根培养；培养温度为26士1℃；暗培养5‑7天，再转到光照下培养5‑8天生根，光照强度为1800‑2000lx，光照时间14‑16h/d；炼苗、移栽的具体过程如下：将生根后的苗先在室内进行移栽前炼苗，3‑5天后从培养瓶中取出，洗净根部培养基，移栽到营养杯中，基质为泥炭土：珍珠岩：蛭石＝2:1:1，组培苗移栽后保持湿度不低于80％，覆盖薄膜并每天喷水1‑2次，两周后即可逐步进行正常管理；所述的方法中用到的培养基均附加蔗糖30g/L，琼脂7g/L，pH调至5.4‑5.8。