一种大肠杆菌细胞内蛋白酶剪切融合蛋白的方法

摘要

本发明涉及一种大肠杆菌细胞内蛋白酶剪切融合蛋白以分离目的蛋白的方法。所使用的宿主菌为通过重组工程方法将强启动子T7驱动的TEV蛋白酶基因整合至大肠杆菌表达宿主菌BL21(DE3)而获得。表达载体为将麦芽糖结合蛋白和填充片段克隆至表达载体pET30(+)而获得。将不含终止子目的基因取代填充片段而获得目的基因融合表达载体，融合蛋白的末端含载体的6个组氨酸。表达载体转化至宿主菌后，在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导之下，同时表达融合蛋白和基于染色体的TEV蛋白酶，TEV作用于麦芽糖结合蛋白和目的蛋白之间的酶切位点而将目的蛋白分离。此细胞内剪切方法省略了融合蛋白分离和TEV酶切等步骤。

主权项

一种大肠杆菌细胞内蛋白酶剪切融合蛋白以分离目的蛋白的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)将融合标签蛋白和填充片段克隆至表达载体，将不含终止子的目的基因取代填充片段而获得融合表达载体；(2)融合表达载体转化至细胞内剪切宿主菌后，在异丙基‑β‑D‑硫代半乳糖苷诱导之下，同时表达融合蛋白和基于宿主菌染色体的TEV蛋白酶，TEV作用于融合标签蛋白和目的蛋白之间的TEV酶切位点而将目的蛋白分离。