主权项 |
一种小叶矮生型广玉兰的嫩茎段离体培养方法,其特征在于,包括以下歩骤:1)、拟接种材料的选择与预处理:选取当年萌发的半木质化新枝,剪去巳展平的叶片,用洗衣粉冲洗三遍,置于自来水龙头下冲洗3h;2)、外植体的消毒:在超净台上,先用75%(vol)乙醇溶液消毒1~2min,然后用0.2%(vol)的新洁尔敏溶液消毒15min,最后用10%(vol)次氯酸钠溶液消毒15~20min,用无菌水冲洗三遍后无菌滤纸吸干水份;3)、无菌系的建立:在超净台上将嫩枝切成1.3~2.0cm长的茎段,每个茎段带1~2个茎节,切除切口处因消毒而坏死的组织,将外植体培养于第一培养基进行新芽的诱导培养,培育成无菌系;4)、丛生芽的诱导及增殖:待茎段新芽伸长至1cm以上时,将新芽切下接种至第二培养基上诱导丛生芽,并在该培养基上进行丛生芽的增殖;5)、将丛生芽在靠近试管苗最下面的叶片着生处下面0.3~0.4mm处切成单芽,切口为每个单芽最下面的叶片着生处下面0.3mm~0.4mm处,并将单芽接种于第三培养基进行壮苗生根培养;6)、试管苗的炼苗与移栽:将生根的试管苗移栽至泥炭和珍珠岩混合的基质中,浇足水后用塑料薄膜覆盖保温保湿防失水萎蔫,7天后揭开薄膜炼苗,每天叶面喷水3~5次,15~20天后施肥料液;30~35天后移栽至灌满纯泥炭的塑料穴盘中,经3~4个月培养后直接移栽至土壤或大的容器中。 |