一种单链DNA核酸修饰壳聚糖磁性微球的制备方法

摘要

本发明公开了一种单链DNA核酸修饰壳聚糖磁性微球的制备方法，(1)化学共沉淀法得Fe₃O₄磁性纳米粒子；(2)反相乳液交联法得CS/Fe₃O₄磁性微球；(3)CS/Fe₃O₄磁性微球加入APTES得-NH₂基修饰CS/Fe₃O₄磁性微球；(4)加入DTPA，在EDC和NHS作用下，得-COOH基修饰CS/Fe₃O₄磁性微球；(5)加入EDC等溶液，加入牛白蛋白溶液震荡，得腺苷核酸适配体修饰CS/Fe₃O₄磁性微球。其克服了常规物理吸附方法的易脱落、不稳定等缺点，并且显著提高核酸适配体固载量。

主权项

一种单链DNA核酸修饰壳聚糖磁性微球的制备方法，其特征在于，按以下步骤进行：（1）采用化学共沉淀法制备Fe₃O₄磁性纳米粒子；（2）采用反相乳液交联法对步骤（1）制得的Fe₃O₄磁性纳米粒子进行壳聚糖包覆，得到粒径均匀、分散性好并具有超顺磁性的CS/Fe₃O₄磁性微球；（3）将步骤（2）制得的CS/Fe₃O₄磁性微球分散于无水乙醇中，加入APTES，对所述CS/Fe₃O₄磁性微球表面进行氨基改性，得到‑NH₂基修饰CS/Fe₃O₄磁性微球；（4）将步骤（3）制得的‑NH₂基修饰CS/Fe₃O₄磁性微球分散于水中，加入DTPA，在EDC和NHS作用下，通过酰胺反应得到‑COOH基修饰CS/Fe₃O₄磁性微球；（5）将步骤（4）制得的‑COOH基修饰CS/Fe₃O₄磁性微球分散于Tris‑HCl缓冲液中，加入EDC溶液、NHS溶液及核酸适配体溶液，室温震荡反应后，磁分离，加入牛白蛋白溶液震荡，消除非特异性吸附，磁分离，用Tris‑HCl缓冲液清洗多次，磁分离，得到腺苷核酸适配体修饰CS/Fe₃O₄磁性微球，分散于Tris‑HCl溶剂中保存。