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一种无附着基规模化培育巨藻幼苗新方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)巨藻胚孢子体获得：采用配子体克隆杂交育种的方法获得巨藻胚孢子体；(2)巨藻胚孢子体发育：将盛有巨藻胚孢子体的混合液移至灭菌的PES培养基中，成为胚孢子体培养液，巨藻胚孢子体逐渐发育长成为200±20μm的巨藻幼孢子体；(3)巨藻幼孢子体通气悬浮培养：通过三步培养法逐渐扩大巨藻幼孢子体培养体系，提高培养温度，在培养容器中采用通气悬浮法培养使巨藻幼孢子体逐渐长成1‑2cm幼苗；所述的PES培养基中各化学成分如下：硝酸钠(NaNO<sub>3</sub>)46mg/L,甘油磷酸酯(C<sub>3</sub>H<sub>7</sub>Na<sub>2</sub>O<sub>6</sub>P·5H<sub>2</sub>O)6.66mg/L，硼酸(H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub>)3.8mg/L，0.5M pH＝8的乙二胺四乙酸(C<sub>10</sub>H<sub>16</sub>N<sub>2</sub>O<sub>8</sub>)18.2ml/L，Trismabase(C<sub>4</sub>H<sub>11</sub>NO<sub>3</sub>)66.6mg/L,六水硫酸铁铵((NH<sub>4</sub>)<sub>2</sub>Fe(SO<sub>4</sub>)<sub>2</sub>·6H<sub>2</sub>O)2.34mg/L，氯化铁(FeCl<sub>3</sub>)100μg/L，一水硫酸锰(MnSO<sub>4</sub>·H<sub>2</sub>O)546μg/L,七水硫酸锌(ZnSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O)73.4μg/L,七水硫酸钴(CoSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O)16μg/L，维生素B<sub>12</sub>(C<sub>63</sub>H<sub>88</sub>CoN<sub>14</sub>O<sub>14</sub>P)1.34μg/L,维生素B1(C<sub>12</sub>H<sub>16</sub>N<sub>4</sub>OS·HCl)66μg/L,生物素(C<sub>10</sub>H<sub>16</sub>N<sub>2</sub>O<sub>3</sub>S)0.66μg/L；所述的三步培养：第一步培养：当巨藻胚孢子体长度发育至200±20μm幼孢子体时，加入胚孢子体培养液16‑20倍体积的灭菌PES培养基，在20‑30μmol photons m<sup>‑2</sup>s<sup>‑1</sup>，10±1℃，光暗周期12:12h条件下，采用通气悬浮法使培养的巨藻幼孢子体至肉眼可见，即巨藻幼孢子体呈线状，柄部与叶片区分不明显，培养过程中，通过调整充气强度，使巨藻幼孢子体均匀悬浮于PES培养基中；第二步培养：当超过60％的巨藻幼孢子体叶片长度达到0.4‑0.5cm时，培养基的体积增加至26‑30倍胚孢子体培养液体积，每5‑6天全部更新PES培养基一次；第三步培养：当超过60％的巨藻幼孢子体长度达到1.0cm以上时，培养容器中的培养液体积为胚孢子体培养液体积的34‑38倍，培养温度为12±1℃；每2～3天完全更新PES培养基一次，换水时彻底清理培养器皿一次。 |
