一种用于检测隐蔽态T-2毒素的免疫磁珠间接竞争ELISA试剂盒的制备及应用

摘要

本发明涉及一种用于检测隐蔽态T-2毒素的免疫磁珠间接竞争ELISA试剂盒的制备方法及应用，以该免疫磁珠为基础建立的免疫磁珠间接竞争ELISA试剂盒，是利用免疫磁珠与样品中的隐蔽态T-2毒素竞争结合抗T-2毒素母核的多克隆抗体，通过检测样品中隐蔽态T-2毒素对免疫磁珠结合抗体的抑制率，可以间接分析隐蔽态T-2毒素的含量。该方法不仅具有免疫磁珠富集纯化特性，而且可以去除非特异性物质的干扰，提高了ELISA中载体对抗原的吸附能力，提高了检测的灵敏度，降低了检测限。该试剂盒检测操作简单，高效快速，价格低廉，无需复杂的仪器及人员操作，可广泛应用于食品、饲料及动物机体内隐蔽态T-2毒素的检测。

主权项

一种用于检测隐蔽态T‑2毒素的免疫磁珠间接竞争ELISA试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒包含有洗涤液、样品稀释液、显色液、终止液，还包括：（1）包被抗原的免疫磁珠：以3‑Ac‑NEOS‑HS‑OVA为包被抗原，经PB缓冲液将包被抗原稀释到200 µg/mL，在含有0.4 mg经EDC和NHS活化的羧基磁珠的离心管中加入1 mL包被抗原，重悬后，在37 ℃下，偶联反应3 h后，洗涤液洗涤2‑4次，磁力架上进行磁分离去除洗液后，再向离心管中加入封闭液0.5 mL，重悬37 ℃下反应1‑2 h，洗涤液洗涤2‑4次制得；（2）检测抗体：可识别隐蔽态T‑2毒素的抗T‑2毒素母核多克隆抗体；（3）酶标抗体：辣根过氧化物酶标记的羊抗兔酶标抗体；    （4）标准T‑2毒素母核工作液：以T‑2毒素作为标准母核供体，配制不同浓度的标准母核工作液。