一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂及其制备方法

摘要

本发明提出了一种用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂及其制备方法，每100mL抗冻剂中包括下列组分：酪蛋白1.0～3.0g、葡萄糖2.0～3.0g、乳糖1.0～2.0g、HEPES BUFFER 3.0～6.0g、甘油2.0～3.0mL、卵黄2～4mL、青霉素45～55万IU、庆大霉素4.5～5.5g、两性霉素B 20～30mg，余量为HANK溶液，解决了现有技术中母畜繁殖周期长、人工授精受胎率低，驴的冷冻精液生产操作程度复杂，难度大的问题。

主权项

一种制备用于驴精液冷冻保存的酪蛋白抗冻剂的方法，其特征在于，包括步骤：1）卵黄的取用鸡蛋应来源于无疫病的鸡场，且所使用鸡蛋须新鲜、完整、干净，取用卵黄前先用75%酒精棉球对蛋壳表面进行消毒，待酒精挥发尽后用蛋清分离器取出完整的卵黄；也可在鸡蛋腰中线处敲开一裂纹，将鸡蛋一分两半，利用二个蛋壳交替倾倒的方法，除去蛋清，留下卵黄；然后用灭菌的注射器穿过卵黄膜抽取卵黄；2）驴冷冻精液抗冻剂的制备用电子分析天平称取酪蛋白1.0－3.0g、葡萄糖2.0－3.0g、乳糖1.0－2.0g、HEPES BUFFER3.0－6.0g、甘油2.0－3.0mL、卵黄2－4mL，将其溶解于50mL HANK溶液中，用磁力搅拌器搅拌均匀后，加HANK溶液到100mL成基础液；在基础液中添加青霉素50万IU、庆大霉素5g、两性霉素B 25mg，配置成Ⅰ液；用精密pH计调整pH为7.1－7.8，然后用0.22μm的滤膜进行过滤除菌，放入4℃冰箱中备用；在进行驴精液冷冻前，取360mLⅠ液加入7.2－14.4ml卵黄，用封口膜封好口后，上下颠倒混匀，于4℃冰箱中过夜，分层；第二天，吸去表层泡沫，将稀释液中层倒入烧杯中，弃去下层沉淀。稀释液经4000rpm/min离心3次，每次30min，去除离心后的稀释液表层杂质及底层沉淀，取中层倒入盐水瓶或蓝口瓶中，加入6－9mL甘油，用磁力搅拌器充分搅拌均匀后，配置成Ⅱ液，置于4℃冰箱中待用；Ⅰ液配好后，可在4℃冰箱中存放约10天；Ⅱ液现用现配，在4℃冰箱中存放时间不宜超过24h。