一种检测大米脂肪中脂肪酸含量的方法

摘要

一种检测大米脂肪中脂肪酸含量的方法，大米样品借助于多功能进样器在顶空瓶内碱催化甲酯化和固相微萃取同时进行，之后进入气相色谱-串联质谱联用仪（GC-MS-MS）检测并定量分析大米脂肪中脂肪酸含量。本发明采用在线甲酯化固相微萃取与气相色谱-串联质谱联用技术，在一个过程中同时完成了甲酯化、萃取、富集、进样和检测五个步骤，操作简单，耗时短；而且在甲酯化反应中以水为基体，降低了萃取头对甲醇与挥发性物质的竞争性吸附，有效提高了固相微萃取对脂肪酸甲酯的萃取和预富集；脂肪酸最低检测限为0.001~0.049µg/L，明显低于采用内标法定量测定油脂脂肪酸的最低检出限4.0mg/L。

主权项

一种检测大米脂肪中脂肪酸含量的方法，其特征在于：大米样品借助于多功能进样器在顶空瓶内碱催化甲酯化和固相微萃取同时进行，之后进入气相色谱‑串联质谱联用仪检测，并定量分析大米脂肪中脂肪酸含量；所述在顶空瓶内同时进行的碱催化甲酯化和固相微萃取步骤包括以下步骤：①大米经过旋风磨粉碎三次后，将25mg大米粉溶解在200mL水中，充分搅拌；②取2mL样品稀释液到顶空瓶内，加入1gNaCl和0.75mL11mmol/L的氢氧化钾/甲醇甲酯化试剂，旋紧顶空瓶盖；③自动进样器将样品瓶移动到保温箱内，插入85μm PA萃取头，使其在60℃、250r/min震荡条件下边甲酯化边萃取1h；所述气相色谱‑串联质谱联用仪的检测步骤为：①进样条件：PA萃取头移入气相色谱‑串联质谱联用仪的进样口，在250℃下解吸2min，不分流进样；②色谱条件：DB‑225MS毛细管柱，30m×0.25mm×0.25μm；载气为高纯氦气，恒流模式，进样口流量为1.0ml/min；柱温箱在50℃保持2min，然后以5℃/min升温至230℃；③串联质谱条件：传输线温度250℃，电子轰击离子源，电子能量为70Ev，离子源温度为200℃，碰撞气压力为1.5mTorr，所述碰撞气为氩气；测定方式采用多反应监测；所述定量分析大米脂肪中脂肪酸含量的步骤包括：①绘制标准曲线：a.称取适量的三肉豆蔻酸甘油酯、三棕榈酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三油酸甘油酯、三亚油酸甘油酯和三亚麻酸甘油酯，用甲苯配制成不同浓度的混标溶液；b.取2mL样品溶液到顶空瓶内，加入1gNaCl和0.75mL11mmol/L的氢氧化钾/甲醇甲酯化试剂，添加10μL混标溶液到顶空瓶内，使其浓度梯度为0.5μg/L、2.5μg/L、12.5μg/L、50μg/L和100μg/L；c.顶空瓶旋紧瓶盖后移送至60℃的保温箱内，插入85μm PA萃取头，完成吸附后，将萃取头插入气相色谱仪进样口，并在250℃下解吸2min保证完全解吸；d.采用仪器检测后，以不加混标的样品为空白，分别测定加标后各脂肪酸甲酯的峰面积，扣除空白后，以加标后各组分的峰面积增加值为y，加标量为x，绘制一条标准曲线，标准曲线强制过原点；②通过标准曲线和待测样品的检测结果计算大米中各种甘油三酯的含量；③采用公式(1)换算得到大米脂肪中脂肪酸的含量：$m_i=\frac{{3M}_i·A_i·V}{{M^{\prime }}_i·k_i·m_0}---\left(1\right)$其中：m_i‑脂肪酸含量；M_i‑脂肪酸分子量；M'_i‑甘油三酯的分子量；A_i‑脂肪酸甲酯峰面积；V‑顶空瓶内溶液体积；k_i‑甘油三酯标准曲线回归方程系数；m₀‑大米样品质量。