发明名称 |
一种用于隐蔽态T-2毒素富集净化的免疫磁珠的制备及应用 |
摘要 |
本发明涉及一种用于隐蔽态T-2毒素富集净化的免疫磁珠的制备及应用,它是以羧基磁珠为载体,抗T-2毒素母核多克隆抗体为识别中间体,经过活化-偶联-洗涤-封阻的过程制备出抗T-2毒素母核多克隆抗体免疫磁珠,在合适的缓冲液中于一定条件下孵育可以高效捕捉、富集检测样本中的隐蔽态T-2毒素。该方法特异性强,高效快速,操作简单,价格低廉,不需要大型仪器和特殊培训的专业操作人员,样品不需要特殊前处理,可广泛应用于食品、饲料及动物机体内隐蔽态T-2毒素的富集分离与检测。 |
申请公布号 |
CN103969431A |
申请公布日期 |
2014.08.06 |
申请号 |
CN201410220924.2 |
申请日期 |
2014.05.23 |
申请人 |
广东海洋大学 |
发明人 |
王雅玲;吴朝金;孙力军;邱妹;徐德峰;刘颖 |
分类号 |
G01N33/531(2006.01)I;G01N33/551(2006.01)I |
主分类号 |
G01N33/531(2006.01)I |
代理机构 |
广州市南锋专利事务所有限公司 44228 |
代理人 |
刘广生 |
主权项 |
一种用于隐蔽态T‑2毒素富集的T‑2毒素母核抗体免疫磁珠的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:以500nm粒径的羧基磁珠为载体,羧基磁珠末端具有有反应活性的羧基基团,在经适量活化剂EDC‑NHS组合处理后,活化磁珠可与抗T‑2毒素母核的多克隆抗体进行偶联,制备成能够富集隐蔽态T‑2毒素的免疫磁珠;具体方法为:(1)清洗: 分别取0.4mg羧基磁珠于2mL离心管中,500µL PBT洗2次,洗涤后用250µL PB 缓冲液超声分散重悬;(2)活化: 分别加入250µL 用PB缓冲液配制的活化剂 EDC和NHS,37 ℃活化2h,保持悬浮状态;(3)偶联: 磁分离,吸去上清液,同上PBT缓冲液洗涤三次,超声重悬,再分别将200µg的T‑2毒素母核抗体加入到已活化磁珠中,37 ℃偶联3h,15r/min旋转保持悬浮状态;(4)封闭: 磁分离,取出上清液,加入100µL的乙醇胺溶液和BSA封闭液,37 ℃封闭2h,保持悬浮状态;(5)保存: 用PBT洗涤磁珠3次,磁分离,弃上清液,用250µL PB重悬,存于4 ℃。 |
地址 |
524000 广东省湛江市麻章区湖光岩东广东海洋大学 |