一种简单高效制备纯化TaqDNA聚合酶的方法

摘要

本发明提出了一种简单高效制备纯化TaqDNA聚合酶的方法。该方法操作步骤为：1）构建TaqDNA聚合酶表达载体pET-30aTAQ；2）在卡那霉素低盐LB平板上转化TaqDNA聚合酶表达载体pET-30aTAQ得到菌株BL21（DE3）/pET-30aTAQ；3）接种到卡那霉素低盐LB液体培养基中振荡培养到OD₆₀₀=0.4～0.9；4）IPTG诱导2～24小时；5）离心收集培养基上清；6）将上清80～100℃加热10分钟后0～-20℃冰浴1分钟；7）再用离心收集上清；8）酶液经检测后冻存即为成品酶。本发明的具有突出优点，纯化步骤仅需要两步离心，一步热循环，方法简单。免除了传统方法的破菌裂解程序和后续繁杂的纯化步骤。提高了TaqDNA聚合酶的纯度，减少了污染，节约了制备成本，缩短了生产周期，可以应用于连续在线固定化生产TaqDNA聚合酶。

主权项

一种简单高效制备纯化Taq DNA聚合酶的方法，其特征在于步骤为：1）．构建Taq DNA聚合酶表达载体pET‑30aTAQ，pET‑30aTAQ为利用载体pET‑30a在ECOR V酶切位点插入Taq DNA 聚合酶基因得到；Taq DNA 聚合酶基因编码产物UniProtKB/Swiss‑Prot编号为P19821.1；2）．在含有终浓度25‑100ug/ml的卡那霉素低盐LB平板上转化Taq DNA 聚合酶表达载体pET‑30aTAQ得到菌株BL21（DE3）/pET‑30aTAQ，37℃培养箱培养过夜；3）.接种到补加终浓25～100ug/ml的卡那霉素低盐LB液体培养基中振荡培养到OD₆₀₀=0.4～0.9；4）.培养物中加入2～5mM的IPTG诱导7～24小时；5）.收集培养物，以相对离心力375～12000g离心5分钟小心收集培养基上清；6）.将上清80～100℃加热10分钟后0～‑20℃冰浴1分钟；7）.以相对离心力375～12000g离心5分钟小心收集上清；8）.酶液经检测后冻存即为成品酶。