一种梅花鹿朊蛋白免疫学检测方法

摘要

本发明涉及一种梅花鹿朊蛋白免疫学检测方法，属于生物检验检疫领域。制备鼠抗重组朊蛋白PrP^res单克隆抗体、兔抗重组朊蛋白PrP^res-His多克隆抗体，采取的包被抗体为兔抗梅花鹿重组朊蛋白PrP^res-His多克隆抗体、检测抗体为鼠抗梅花鹿重组朊蛋白PrP^res单克隆抗体，所用的Elisa的方式具有准确度高的优点，同时所受环境的限制较少，本发明可应用于制备梅花鹿朊蛋白双抗夹心ELISA检测试剂盒。

主权项

一种梅花鹿朊蛋白免疫学检测方法在制备双抗夹心ELISA检测试剂盒中的应用，包括下列步骤：（一）采用保藏号 CGMCC No.5556 的杂交瘤细胞株获得鼠抗重组朊蛋白PrP^res单克隆抗体，所述杂交瘤细胞株的保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，分类命名：产朊蛋白单克隆抗体细胞株；（二）兔抗重组朊蛋白PrP^res‑His多克隆抗体的制备：用重组朊蛋白PrP^res‑His免疫雌性家兔，皮下3点注射，免疫剂量1mg/只/次，间隔14d免疫，共免疫3次，第1次采用弗氏完全佐剂，第2、3次采用弗氏不完全佐剂，第3次免疫后14天心脏放血，37℃放置1小时后，4℃过夜，次日3000转离心15分钟，去上清，辛酸‑硫酸铵法纯化兔多抗血清，纯化后的IgG用PBS透析3次，用BCA法测定蛋白浓度，‑80℃冻存；（三）采用步骤（二）获得兔抗重组朊蛋白PrP^res‑His多克隆抗体作为包被抗体，采用步骤（一）获得的鼠抗重组朊蛋白PrP^res单克隆抗体作为检测抗体，制备双抗夹心ELISA检测试剂盒。