一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒

摘要

一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，包括以下步骤：(1)设计针对羊痘病毒主要免疫基因P32的短肽；(2)常规合成肽技术合成肽段；(3)基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒；(4)优化条件，最终制备出检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒。本发明包被用抗原属于体外人工合成的免疫肽片段，减少了使用全病毒的危险性，避免病毒的扩散和逃逸。合成肽纯度高，免疫学特性与羊痘病毒粒子相似，可替代羊痘病毒粒子作为检测用抗原，从而制备出敏感、特异、安全和可靠的羊痘病毒血清抗体检测试剂盒。

主权项

一种基于合成肽检测羊痘病毒血清抗体的试剂盒，其特征在于包括以下步骤制备而成：a.利用DNAstar软件设计针对羊痘病毒主要免疫蛋白P32的两条短肽片段；b.将步骤a所设计序列采用常规合成肽方法合成肽段，肽段序列如下：A：PELKSDNDIFYKKVDTVKDFKNSDVNFFLKDKKDDIB: YKLEKELKLNRQVLNDSSKYILHNTKYLSKKRANEMKN；c.采用方正滴定方法，确定合成肽抗原包被ELISA板的浓度；d. 将阴性、阳性血清用PBS稀释为1:10，1:20，1:40，1:80，1:160 5个稀释度，进行ELISA检测，取P/N值最大、OD值接近1的血清最大稀释倍数为最适稀释度，确定阳性血清、阴性血清及待检血清稀释度和反应时间；e.利用棋盘滴定法选择工作浓度，根据“阳性血清OD值接近1”和“阳性值/阴性值最大”的原则，确定酶标记抗体工作浓度及反应时间；f. 采集未免疫过羊痘病毒疫苗的健康羊血清，测其OD值并除以标准阴性血清的OD值, 将所得到比值的平均值加标准差作为判定阴/阳性的临界值。