一种仿刺参体腔液病毒的快速定量检测方法

摘要

本发明公开了一种仿刺参体腔液病毒的快速定量检测方法，包括以下步骤：1)仿刺参体腔液的提取；2)体腔液细胞超声波破碎，冻融，释放病毒粒子；3)体腔液过滤，制成含有病毒的氧化铝滤膜；4)避光染色、制片、观察、计数。本发明可以在不杀死仿刺参的情况下对仿刺参体内病毒进行快速直接检测，检测过程可以在5小时内完成，具有操作简单、快捷、准确的特点，可用于仿刺参苗种繁育的种参快速筛选。

主权项

一种仿刺参体腔液病毒的快速定量检测方法，该方法包括：(1)将无菌注射器针头从刺参排泄孔上方腹部1.5～2cm处刺入腹腔，进入腹腔0.5～1cm后定量抽取体腔液1.5～2mL；(2)将体腔液采用冻融处理，再进行超声破碎；(3)将体腔液用孔径为0.02μm的氧化铝滤膜过滤，在负压(15～20kPa)条件下把样品抽滤至干；(4)在冰浴条件下，用浓度为0.1％～0.5％的核酸荧光染色剂工作液将(3)中经抽滤的氧化铝滤膜避光染色10～15min；干燥后制片，在荧光显微镜蓝色激发光道、油镜下观察病毒颗粒，计算病毒颗粒数。