利用GST表达体系制备的Fertilin Beta胞外段高效价抗体及应用

摘要

本发明属于生物工程技术领域，涉及利用GST表达体系制备的Fertilin Beta胞外段高效价抗体及应用。利用基因工程技术，将Fertilin Beta基因胞外段克隆到原核表达载体中，经酶切鉴定后，用重组质粒转化大肠杆菌，并IPTG诱导产生GST-Fertilin Beta融合蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰兔制备抗血清并用ProteinA/G纯化。抗体的效价及特异性采用ELISA和Western blot检测，并应用免疫荧光检测了Fertilin Beta蛋白特异性定位于精子头后部。该抗Fertilin Beta多克隆抗体效价与特异性良好，可以应用于细胞中Fertilin Beta蛋白的检测并能有效检出Fertilin Beta蛋白特异性定位于精子头后部，对于系统研究Fertilin Beta蛋白功能意义重大。

主权项

原核表达GST‑Fertilin Beta融合蛋白的多克隆抗体，其特征在于利用GST表达体系以Fertilin Beta蛋白341‑373位氨基酸对应DNA片段作为特异序列制备的GST‑Fertilin Beta融合蛋白作为抗原免疫动物产生抗血清而获得，该抗血清中抗GST‑Fertilin Beta抗体的滴度高达1∶1000000，并经过Western blot鉴定该Fertilin Beta抗体具有较好的特异性，其中，341‑373位氨基酸序列为：Glu Ala Ile His Phe Ser Gly Val Lys Ile Phe Ser Asn Cys Ser1                   6                   11Phe Glu Asp Phe Ala His Phe Ile Ser Lys Gln Lys Ser Gln Cys16                  21                  26Leu His Asn31其对应核苷酸序列为：gaagcaattc atttcagtgg tgtgaagatc tttagtaact gcagcttcga agactttgca 60cattttattt caaagcagaa gtcccagtgt cttcacaat 99。