Método mejorado para cuantificar ADN en una muestra biológica

摘要

Un método para cuantificar ADN de suceso Bt11 en una muestra biológica que comprende ácidos nucleicos de maíz, comprendiendo el método: (a) poner en contacto dicha muestra biológica con un primer par de cebadores, que comprende un primer cebador que consiste en SEC ID NO: 1 y un segundo cebador que consiste en SEC ID NO: 2, y una sonda marcada con un colorante fluorescente que comprende SEC ID NO: 3, en el que dicho primer par de cebadores, cuando se usa en una reacción de amplificación de ácidos nucleicos con ADN genómico procedente de maíz del suceso Bt11, produce un primer amplicón que comprende SEC ID NO: 4, y en el que dicho primer amplicón es de diagnóstico para el suceso Bt11; (b) poner en contacto dicha muestra biológica con un segundo par de cebadores, que comprende un primer cebador que consiste en SEC ID NO: 5 y un segundo cebador que consiste en SEC ID NO: 6, y una segunda sonda marcada con un colorante fluorescente que comprende SEC ID NO: 7, en el que dicho segundo par de cebadores, cuando se usa en una reacción de amplificación de ácidos nucleicos con ADN genómico de maíz, produce un segundo amplicón que comprende SEC ID NO: 8, y en el que dicho segundo amplicón es indicativo de la presencia del gen adhl de maíz; (c) proporcionar una condición de reacción de amplificación de ácidos nucleicos y un instrumento de PCR capaz de llevar a cabo una PCR en tiempo real cuantitativa; (d) llevar a cabo la PCR en tiempo real cuantitativa usando los cebadores y sondas de (a) y (b), produciendo de ese modo el primer amplicón y el segundo amplicón; (e) detectar simultáneamente dicho primer amplicón y dicho segundo amplicón según se producen por dicho instrumento de PCR; y (f) calcular una cantidad relativa de dicho primer amplicón en comparación con dicho segundo amplicón, con lo que la cantidad de dicho primer amplicón es indicativa de la cantidad de ADN de Bt11 en dicha muestra biológica.