以赤石脂为载体的固定化脂肪酶的制备方法

摘要

本发明公开了一种以赤石脂为载体的固定化脂肪酶的制备方法，首先对赤石脂分别进行羟基化和硅烷化处理，然后将处理好的赤石脂载体加入到肪酶溶液中，经摇床振荡吸附固定后，用海藻酸盐凝胶对吸附了脂肪酶的赤石脂进行包埋，最后冷冻干燥得到赤石脂固定化脂肪酶。本方法采用的赤石脂具有原料易得，价格低廉的特点，同时也具有很好的物理吸附性和表面化学活性，经过改性以及包埋处理后，能显著提升载体的稳定性，制得的固定化酶酶活力回收率高，稳定性好，而且本发明的工艺简单，操作成本低，有望推动酶法制备生物柴油的工业化进程。

主权项

一种以赤石脂为载体的固定化脂肪酶的制备方法，其特征在于包括以下步骤： （1）赤石脂载体的羟基化处理：按每克赤石脂加入6‑8ml盐酸的比例，将赤石脂浸渍于盐酸溶液中，并于35‑40℃振荡反应过夜，然后用去离子水洗涤至中性，烘干；（2）赤石脂载体的硅烷化处理：按每克羟基化处理的赤石脂添加2‑4ml石油醚和0.02‑0.04 mL硅烷化试剂的比例，在羟基化处理的赤石脂中加入石油醚和硅烷化试剂，充分混匀后，常温下放置于摇床中反应3‑5h，待反应结束后，过滤，滤渣分别用石油醚和无水乙醇洗涤3‑5次，烘干；（3）脂肪酶的固定化：按给酶量为40‑90mg/g的比例向脂肪酶溶液中加入硅烷化赤石脂，密封，在20‑40℃下振荡固定1‑5h后，抽滤，滤渣用缓冲液洗涤直至没有蛋白洗脱下来，冷冻干燥后备用；（4）赤石脂固定化酶的包埋：按每克赤石脂固定化酶添加10‑20ml海藻酸盐溶液的比例，在赤石脂固定化酶中加入质量百分比浓度为1‑3%的海藻酸盐溶液，充分搅拌均匀，用5号针头的注射器将溶液逐滴打入到质量百分比浓度为1‑2%的氯化钙溶液中， 并在4℃下固化1‑3h，抽滤，充分洗涤，然后冷冻干燥，即得到固定化脂肪酶；其中所述盐酸浓度为1‑3mol/L；所述硅烷化试剂为甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷、3‑氨丙基三乙氧基硅烷、N‑(β‑氨乙基)‑γ‑氨丙基三乙氧基硅烷中的一种；所述海藻酸盐溶液为海藻酸钠溶液。