一种靶向纳米钻石载体和靶向药物及其制备方法和应用

摘要

本发明提供了一种靶向纳米钻石载体ND-PEG-Tf及其制备方法，以及采用物理吸附负载化疗药物阿霉素制备而成的靶向纳米药物ND-PEG-Tf-DOX。该载体通过与人肝癌细胞（HepG2）和正常肝细胞（L-02）作用，且用游离转铁蛋白做竞争剂，结果显示ND-PEG-Tf载体是转铁蛋白受体介导进入细胞；用MTT测试ND-PEG-Tf-DOX与两种细胞作用，表明该纳米药物对癌细胞具有靶向抗肿瘤效应，其与单独阿霉素对细胞杀伤力相比，ND-PEG-Tf-DOX具有缓释药物特性。因此ND-PEG-Tf-DOX既能降低化疗药物对正常细胞的毒副作用，又能提高化疗药物对肿瘤细胞的杀伤力。可在制备靶向抗肿瘤药物中应用。

主权项

一种靶向纳米钻石载体ND‑PEG‑Tf的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将羧基化的纳米钻石，在70‑80℃真空干燥箱干燥过夜，按每毫克羧基化的纳米钻石加入0.05‑0.2mL的无水N,N二甲基甲酰胺（DMF）溶剂，超声分散形成悬浊液，再按每毫克羧基化的纳米钻石加入0.4‑0.6mL的二氯亚砜（SOCl₂），在65‑70℃回流24h，在40‑45℃下旋转蒸发掉过量的SOCl₂，得到酰氯化的纳米钻石，按每毫克酰氯化的纳米钻石加入0.5‑0.8mL的无水DMF溶剂得到酰氯化的纳米钻石悬浊液；（2）按酰氯化的纳米钻石与分子量为4000的PEG的质量比1：3‑4，将PEG加入步骤（1）得到的酰氯化的纳米钻石悬浊液中，同时按每毫克酰氯化的纳米钻石加入0.1‑0.2mL的三乙胺，在90℃回流24h，15000rpm下离心5min，用重蒸水洗涤5次，除去上清液，得沉淀物纳米钻石‑聚乙二醇ND‑PEG‑OH，真空干燥；（3）按每毫克ND‑PEG‑OH加入1.5‑2mL的DMF溶剂，超声分散30min形成悬浊液，按ND‑PEG‑OH、琥珀酸酐（SA）和4‑二甲胺基吡啶（DMAP）的质量比1：2‑2.5：2‑2.5，分别加入SA和DMAP，在90℃回流24h；15000rpm下离心，用重蒸水洗涤5次，除去上清液，获得ND‑PEG‑COOH沉淀物，真空干燥；（4）按每毫克ND‑PEG‑COOH加入0.3‑0.5mL pH8.0的硼酸缓冲溶液，超声分散30min形成悬浊液，接着加入2倍ND‑PEG‑COOH质量的1‑乙基‑(3‑二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐（EDC），反应30min；（5）然后，按ND‑PEG‑COOH与分子量为80KDa转铁蛋白（Tf）的质量比1：0.25‑1，取Tf加入步骤（4）的反应液中，摇匀过夜；15000rpm离心5min，用重蒸水洗涤5次，除去上清液，得沉淀物纳米钻石‑聚乙二醇‑转铁蛋白（ND‑PEG‑Tf）冷藏即可。