一种裂谷热病毒RT-LAMP的检测方法

摘要

本发明涉及一种裂谷热病毒RT-LAMP的检测方法检测过程中：步骤a，建立如下扩增反应体系：5μl RNA样品、2.5μl Bst DNA聚合酶缓冲液(10x)、1μl Bst DNA聚合酶(8U/μl)、1μl AMV反转录酶(10U/μl)、1μld NTP(25mmol/μl)、5μl Betaine(5μmol/μl)、1μl Mg SO4(100nmol/μl)、对应于L基因的四条引物各1μl引物浓度为F3与B3：5pmol/μl、BIP与FIP：70pmol/μl、H₂O补足至25μl；步骤b，将上述各组分混匀后，在65℃水浴中反应1.5～2h；步骤c，用1.5％琼脂糖凝胶进行电泳，然后观察结果。本发明新型的RT-LAMP技术具有快速灵敏、操作简单，安全性高，价格低廉，不需要特殊仪器设备等优点，特别适用于基层检验检疫机构普及应用，为裂谷热病毒早期诊断提供了一种快速、使用的诊断方法。

主权项

一种裂谷热病毒RT‑LAMP的检测方法，其特征在于，根据GenBank中登录的裂谷热L片段基因分析其保守序列，采用的RT‑LAMP引物序列如下：F3：5′‑CCCCCAATAAAGTGAAAATTCC‑3′B3：5′‑ACATCCCCTAATGATCAGTG‑3′FIP(F1c+F2)：5′‑TGTTGCACAAGTCCACACAG‑GAGACACATGGCATCAGG‑3′BIP(B1c+B2)：5′‑TCAGATGATGCAAGGAAGTGGA‑TTTAGGAGAGGTGAACTCACA‑3′F2：5′‑GAGACACATGGCATCAGG‑3′F1C：5′‑TGTTGCACAAGTCCACACAG‑3′B2：5′‑TTTAGGAGAGGTGAACTCACA‑3′B1C：5′‑TCAGATGATGCAAGGAAGTGGA‑3′。