O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖、转基因复合物微粒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖的制备方法，并公开了一种由其作为载体的三元转基因复合物微粒。本发明通过壳聚糖氨基的邻苯二甲酰亚胺化、壳聚糖与烷基胺的偶联和壳聚糖氨基的脱保护等反应制备O-烷基氨基甲酸酯壳聚糖，实现了对壳聚糖重复单元C₆位羟基的选择性修饰，同时保留了壳聚糖具有生物活性功能的自由氨基，且以C₈-C₂₀的直链烷基胺为烷基供体，得到酸敏感氨基甲酸酯键为连接键的烷基氨基甲酸酯壳聚糖，以其为载体制备的三元转基因复合物微粒具有细胞毒性低，转染效率高的转染特点，在基因治疗领域具有广阔的应用前景。

主权项

一种O‑烷基氨基甲酸酯壳聚糖的制备方法，包括以下步骤：①壳聚糖氨基的邻苯二甲酰亚胺化：将壳聚糖与邻苯二甲酸酐反应生成邻苯二甲酰亚胺；②壳聚糖与烷基胺的偶联：将步骤①得到的邻苯二甲酰亚胺分散到无水N‑甲基吡咯烷酮中，再加入偶联剂，偶联剂与壳聚糖重复单元的摩尔比为0.1‑2:1，所述偶联剂选自羰基二咪唑、光气和碳酸二甲酯中的一种，在常压、氮气气氛下于30‑80℃搅拌反应1‑5h，再加入C₈‑C₂₀的直链烷基胺，与壳聚糖重复单元的摩尔比为0.1‑2:1，常压、氮气气氛下于30‑80℃搅拌反应1h‑5h，得到反应液；③反应物中氨基的脱保护：在步骤②的反应液中加入无水乙醇，抽滤，收集沉淀，再加入水合肼溶液和甲醇的混合液，回流，脱去邻苯二甲酰基团，收集产物，通过索氏提取进行纯化，再经过真空干燥得到终产品。