一种以葡萄糖氧化酶作为烟草加工辅助的酶制剂及制备、使用方法

摘要

一种以葡萄糖氧化酶作为烟草加工辅助的酶制剂及制备、使用方法，属于烟草复烤前添加的提高烟草品级的酶制剂。本发明将已知葡萄糖氧化酶酶源进行除杂精制，以PMSF抑制蛋白酶活性，以精制获得的沉淀用0.0001％的蔗糖低聚物液调制为10000～15000U/mL的酶原液，最佳调制为12000U/mL的酶原液成为烟草活性添加剂，使用时用水稀释替代片烟复烤时原有的第二润叶用水，能较好降解烟草中的糖含量单一指标，有协调均衡各物质变化提高烟草品质的作用。

主权项

一种制备以葡萄糖氧化酶作为烟草加工的辅助的酶制剂的方法，该制剂葡萄糖氧化酶的酶活力为12000U/mL，其特征是该酶制剂的制备方法包括以下步骤：⑴取葡萄糖氧化酶粗品固体或液体加入含有浓度为0.1mol/L蛋白酶抑制剂PMSF的缓冲液溶解或稀释，葡萄糖氧化酶粗品与含有PMSF的缓冲液配比为1g︰20mL或为1mL︰10mL，3500r/min离心20min，取上清液，加入(NH₄)₂SO₄，使硫酸铵终浓度为55％，静置24h后4℃ 15000r/min离心30min，取上清液，补加浓度为10% （W/V）的(NH₄)₂SO₄过夜，再4℃ 15000r/min离心30min，收集沉淀、合并；上述葡萄糖氧化酶粗品为微生物来源的未精制的葡萄糖氧化酶：⑵检测沉淀中葡萄糖氧化酶的酶活力，加入浓度0.0001%的蔗糖低聚物液调制为酶原液，使其酶活力为12000U/mL；所述步骤（2）所得的酶原液，经‑8℃冷冻干燥浓缩8～10倍获得浓缩复合酶制剂。