鱼鳃细胞系的建立方法

摘要

本发明公开了一种鱼鳃细胞系的建立方法，包括用抗生素水在室温下处理暂养的健康鱼类，用冰水将鱼体麻醉后浸入5%二氯乙醚消毒5min，再用70%乙醇棉球对鱼体表面进行灭菌处理，然后在超净台内将鳃组织切成0.8-1.51mm³的小块，用含有抗生素的Leibovitz’sL-15培养基冲洗3次，接种到含有5mLLeibovitz’sL-15完全培养基的25cm²细胞培养瓶中，放入温度为28°C的培养箱中培养，每隔3-4d换1次完全培养基液；当鳃组织细胞达到95%融合时，按照标准的胰蛋白酶消化方法，以1:2的比例分瓶传代培养，如此传代培养至50代，便建立起鱼鳃细胞系。本发明方法使难于培养的鱼鳃细胞得到了顺利培养，能在体外稳定生长并建系成功，可传代超过50代，并能稳定增殖，成为无限细胞系。

主权项

鱼鳃细胞系的建立方法，包括如下步骤：（1）用含500 IU/mL青霉素和500 μg/mL链霉素的抗生素水在室温下处理暂养的健康鱼类；（2）将（1）处理的鱼体用冰水麻醉后，浸入5%的二氯乙醚消毒5 min，然后用70%乙醇的棉球对鱼体表面进行灭菌处理；（3）将（2）处理的鱼体放在超净台内，在无菌条件下将鳃组织切成0.8‑1.51 mm³的小块，然后用含有抗生素的Leibovitz’s L‑15培养基冲洗3次；（4）将（3）获得的组织片段接种到含有5 mL Leibovitz’s L‑15完全培养基的25 cm²细胞培养瓶中，放入温度为28°C的培养箱中培养，每隔3 ‑4 d换1次完全培养基液；（5）当（4）的组织细胞达到95%融合时，按照标准的胰蛋白酶消化方法，以1:2的比例分瓶传代培养，如此传代培养至50代，便建立起鱼鳃细胞系。