一种从胡柚白皮层分离纯化柚皮苷和新橙皮苷的方法

摘要

本发明提供一种从胡柚白皮层分离纯化柚皮苷和新橙皮苷的方法，用大孔树脂和高速逆流色谱的联用技术，以胡柚白皮层烘干粉末为原料，先制备大孔树脂粗提物粉末；再通过高速逆流色谱进一步分离、纯化得到高纯度的柚皮苷和新橙皮苷。本发明操作简单，无需高温高压及惰性气体保护，合成工艺简单；无需使用有较大刺鼻气味的试剂，生产流程安全易操作；可用于分离利用性质非常接近的黄酮类化合物，适用性广；生产周期短，纯化回收率、纯度和准确度高；样品用量少，设备投入少，条件稳定容易控制，最终纯化的柚皮苷和新橙皮苷纯度均≥95%，适用于工业化生产和科学研究。

主权项

一种从胡柚白皮层分离纯化柚皮苷和新橙皮苷的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：（1）制备大孔树脂粗提物粉末：按照固液比1:25的比例取烘干的提取材料胡柚白皮层与80%乙醇，超声提取两次，超声提取温度为40℃，4000 rpm离心20 min，合并两次上清液，在旋转蒸发仪上蒸干得浸膏，溶于ddH₂O中，将提取液上D101大孔树脂、冲洗、洗脱，收集洗脱液、浓缩、干燥得大孔树脂粗提物粉末；（2）分离柚皮苷和新橙皮苷：按4:3:1:2配制氯仿‑甲醇‑正丁醇‑水溶剂体系，充分摇匀过夜后，上相为固定相，下相为流动相，固定相首先以20 mL/min流速泵入高速逆流色谱，稳定后，将转速调至800 rpm，同时流动相以2 mL/min速度通过高速逆流色谱，待流出液分层后进样大孔树脂粗提物粉末，根据色谱仪检测器采集的图谱分管收集各组分，用HPLC测定各组分的纯度，分别合并含有单一柚皮苷和新橙皮苷的试管，在旋转蒸发仪上50℃蒸干即得到柚皮苷和新橙皮苷；其中步骤（1）所述的上D101大孔树脂、冲洗、洗脱条件为：柱床体积为20 mL,上样流速2 mL/min，先用水冲洗4 柱床体积，然后依次用10%，20%，30%，40%，50%，60%，70%，80%乙醇溶液梯度洗脱，每个梯度洗4 柱床体积，洗脱流速为2 mL/min，合并10%‑60%洗脱液。