干酪乳杆菌由来抑菌活性物质的分离方法

摘要

本发明属于食品安全技术领域，为干酪乳杆菌由来抑菌活性物质的分离方法，该方法采用乙酸乙酯萃取干酪乳杆菌的培养上清液，通过旋转蒸发仪对各萃取相进行浓缩。包括如下步骤：干酪乳杆菌的活化和扩大培养；干酪乳杆菌培养上清液处理；使用乙酸乙酯对干酪乳杆菌培养上清液进行萃取；随后使用旋转蒸发仪对各萃取相进行浓缩。

主权项

一种干酪乳杆菌由来抑菌活性物质的分离方法，其特征在于采用乙酸乙酯对干酪乳杆菌培养上清液进行等体积萃取，使用旋转蒸发仪对各萃取相进行浓缩，所述具体步骤为：步骤一，干酪乳杆菌的活化和扩大培养，将冷冻保存于‑80℃冰箱中的干酪乳杆菌取出并迅速解冻，按每5 ml培养基中接种20μl菌液的比例，将浓度为1×10⁹ cfu/ml的种菌液接种至灭菌MRS肉汤培养基中，置于37℃恒温静止培养14‑16 h后，取菌液接种于灭菌MRS肉汤培养基中，置于37℃恒温静置培养48 h；步骤二，干酪乳杆菌培养上清液处理，将步骤一得到的培养液置于无菌离心管中，于4℃、8000 rpm离心30 min，弃去菌体沉淀，得到的上清液再通过0.45 μm超滤膜超滤；步骤三，使用乙酸乙酯萃取干酪乳杆菌培养上清液，将步骤二得到的上清液用等体积的乙酸乙酯萃取3次，萃取后得到上层乙酸乙酯相、中间层白色絮状沉淀相和下层水相；步骤四，使用旋转蒸发仪对各萃取相进行浓缩，将步骤三萃取得到的上层乙酸乙酯相、中间层白色絮状沉淀相、下层水相进行旋蒸浓缩，浓缩后得到乙酸乙酯相悬蒸相、乙酸乙酯相悬蒸余相、中间相悬蒸相、中间相悬蒸余相、水相悬蒸相和水相悬蒸余相，将浓缩后的各相液体进行抑菌活性检测，随后置于4℃冷藏保存。