单增李斯特菌环介导等温扩增技术快速检测用引物组和试剂盒

摘要

本发明涉及生物检测试剂，具体涉及一种单增李斯特菌环介导等温扩增技术快速检测用引物和试剂盒。单增李斯特菌环介导等温扩增技术快速检测用引物，所述的引物为一套单增李斯特菌特征性引物组，一套引物组由两对引物组成，一对引物为外引物，一对为内引物。本发明的试剂盒由一套引物、反应液、BstDNA聚合酶、样品预处理液、显色剂和阳性对照液等组成；检测方法包括细菌DNA的提取、环介导等温核酸扩增和显色检测等。使用本试剂盒通过对样品简单的处理便可快速检测样品中的单增李斯特菌，具有灵敏度高、特异性强、操作简单、通过肉眼即可判定结果等优点。

主权项

单增李斯特菌环介导等温扩增技术快速检测试剂盒，其特征在于：该试剂盒包括引物组、反应液、Bst DNA聚合酶、样品预处理液、显色剂和阳性对照液；所述的引物组由两对引物组成，一对引物为外引物，一对为内引物，序列分别为：外引物1：CAAGCACTGTAGTAGTCGA外引物2：CGTAATAATACTGTTATCAACACC内引物1：GTTTGCTTTTTTAATTGCGTCAACATTTTAGCTGGTGATACTCTTTGG内引物2：ACAAGTAAATAATGAGGTTGCTGCTTTTTCGGACGTTTAACCAAGTTG；引物组由体积比为1：1：4：4的20‑30μM外引物1、外引物2、内引物1与内引物2组成；所述的反应液是由体积比为5：2：1：2的10×Thermopol 反应缓冲液、 7.5～12.5mM dNTP, 100‑200mM MgSO₄与25～37.5M 甜菜碱组成；所述的10×Thermopol 反应缓冲液含有200 mM  pH8.8三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐、100 mM氯化钾、100 mM硫酸铵、20 mM硫酸镁和体积百分比浓度为1%曲拉通X‑100；Bst DNA聚合酶每微升含8～16个活性单位；样品预处理液是由20mM  pH 8.0  Tris‑HCl ，2mM EDTA，体积百分比浓度为1.2%曲拉通X‑100组成；显色剂为荧光染料；阳性对照液为单增李斯特菌标准菌株基因组DNA。