一种喜树碱作用于虫体细胞靶蛋白的精准定位方法

摘要

一种喜树碱作用于虫体细胞靶蛋白的精准定位方法，属于生物农药技术领域。其特征在于包括以下步骤：1）称取喜树碱原药、氢氧化钠、水配制喜树碱溶液；2）将喜树碱溶液稀释处理昆虫，最后365-430nm波长下置于荧光显微镜下观察喜树碱的沉积部位，然后将该部位的大量细胞置于冰箱中冷冻，将冷冻后的细胞研磨粉碎，再超声处理，使其释出蛋白质等细胞液，再将细胞液离心、过滤，保留上清液；3）将上清液通过亲和层析法过喜树碱柱子，乙腈－水溶剂系统梯度洗脱，即可精准定位出喜树碱与虫体细胞相结合的靶蛋白。该喜树碱作用于虫体细胞靶蛋白的精准定位方法，可快速、准确测定生物碱类在细胞中的沉积部位，精确度高，稳定性好。

主权项

一种喜树碱作用于虫体细胞靶蛋白的精准定位方法，其特征在于包括以下步骤：1）按重量百分比称取喜树碱原药0.1‑1.5%，氢氧化钠2‑9%，水89‑98%，反应温度控制在45‑65℃下不断搅拌至完全溶解，配制成喜树碱溶液，备用；2）将步骤1）中的喜树碱溶液稀释至900‑1200倍，取1‑5μL喷雾或饲喂处理昆虫，每隔10‑15h处理一次，共处理3‑7天至虫体出现慢性中毒症状直至濒临死亡为止，再用2‑8μL浓度为1.2‑1.5%的盐酸溶液喷雾或浸渍昆虫2‑5min，使其充分浸润，最后365‑430nm波长下置于荧光显微镜下观察，荧光区域即为喜树碱的沉积部位，解剖分离喜树碱沉积部位，然后将该部位的大量细胞迅速置于‑70℃冰箱中冷冻30‑50min，将冷冻后的细胞研磨粉碎，再超声处理7‑15min，使其充分释出蛋白质等细胞液，再将细胞液9000‑12000rpm、2‑9℃离心11‑19min，过滤弃沉淀，保留上清液，备用；3）将处理后的上清液，通过亲和层析法过喜树碱柱子，乙腈－水溶剂系统梯度洗脱2‑5次，即可精准定位出喜树碱与虫体细胞相结合的靶蛋白。