一种重组人表皮生长因子的新型制备方法

摘要

本发明的目的是提供一种方法简单、价格低廉的Ssp内含肽系统介导重组人表皮生长因子的制备方法，该方法利用液相切割和离子交换层析代替传统的柱上切割和几丁质亲和层析。采用液相切割代替了传统Ssp内含肽系统介导的蛋白纯化方法中所用的柱上切割，降低了由于融合蛋白自动裂解造成的目的蛋白的损失；采用离子交换层析替代了昂贵的几丁质亲和层析，大幅度的降低了重组人表皮生长因子的纯化成本，简化了操作步骤，克服了大规模工业化生产重组人表皮生长因子的瓶颈。

主权项

一种重组人表皮生长因子的新型制备方法，其特征在于：按照以下步骤依次进行：1)将hEGF与内含肽、几丁质结合域融合表达，表达载体为pTWIN1，宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)或ER2566；2)将表达融合蛋白的宿主细胞破碎后，离心获得沉淀，融合蛋白以包涵体形式存在于沉淀中，包涵体经洗涤、溶解、复性后，通过液相切割诱导内含肽自切割位点释放hEGF蛋白，再通过硫酸铵分级沉淀、离子交换层析纯化获得纯度大于97％的不含有多余氨基酸的hEGF蛋白；所述步骤1)中hEGF、内含肽和几丁质结合域融合表达的连接顺序为几丁质结合域‑内含肽‑hEGF；所述步骤2)中的重组人表皮生长因子的切割方法为液相切割，即通过降低复性缓冲液pH值，室温诱导Ssp DnaB内含肽自切割，释放出hEGF；所述复性缓冲液初始pH值为8.0‑10.0；降低后的复性缓冲液pH值为6.0‑7.0；所述步骤2)中硫酸铵分级沉淀的纯化方法为10％‑40％硫酸铵溶液除去杂蛋白，60％‑80％硫酸铵溶液沉淀hEGF。