一种快速、准确的检测杂交水稻种子纯度的方法

摘要

本发明公开了一种快速、准确的检测杂交水稻种子纯度的方法，包括以下步骤：根据种子纯度要求，计算抽样样本量。等量抽样并混合提取DNA或分别提取DNA后再等量混合。按检测位点的碱基序列，设计PCR引物扩增检测位点。回收并纯化PCR扩增产物。利用扩增产物建库并进行高通量测序。根据检测位点序列比例，计算种子纯度。本发明的突出特点是：很好地满足了商品杂交种子纯度检测中对检测速度与准确性的要求。

主权项

一种快速、准确的检测杂交水稻种子纯度的方法，其特征在于，包括以下步骤：根据种子纯度要求，计算抽样样本量，所述抽样样本量的计算方法是利用Data Processing System2000软件中的二项分布总体均数置信区间功能；等量抽样并混合提取DNA或分别提取DNA后再等量混合；按检测位点的碱基序列，设计PCR引物扩增检测位点，所述检测位点为筛选出的父本和母本差异基因的序列；回收并纯化PCR扩增产物；利用扩增产物按SOLiD5500高通量测序操作手册中的扩增子串联法进行建库，在文库的构建过程中，采用条形码对检测的样本进行区分，共采用64个条形码；通过检测位点测序，分别获得与父本和母本完全匹配的片段数量，进行计算种子纯度，种子纯度=2x/(x+y)×100%，其中，X为所述父本的片段数，Y为所述母本的片段数；所述父本为R7723，所述母本为金科1A；所述父本和母本差异基因为株高基因HD；所述PCR引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物为序列表中的SEQ ID NO.3，所述反向引物为序列表中的SEQ ID NO.4。