一种嗜铬粒蛋白A化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法

摘要

本发明公开了一种嗜铬粒蛋白A化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括如下组分：1)嗜铬粒蛋白A标准品；2)辣根过氧化物酶标记的嗜铬粒蛋白A单克隆抗体；3)嗜铬粒蛋白A单克隆抗体包被的磁颗粒；4)白色不透明微孔板；5)洗涤液；6)化学发光底物A及B工作液。本发明将化学发光免疫分析与纳米磁颗粒技术相结合，提供一种嗜铬粒蛋白A化学发光免疫分析试剂盒。本方法既克服了传统ELISA方法灵敏度低、准确度较差的缺点，又没有RIA技术的放射性污染，具有安全环保、特异性强、灵敏度及准确度高等优点。

主权项

一种嗜铬粒蛋白A化学发光免疫分析试剂盒，其特征是包括如下组分：1）嗜铬粒蛋白A标准品；2）辣根过氧化物酶标记的嗜铬粒蛋白A单克隆抗体；3）嗜铬粒蛋白A单克隆抗体包被的磁颗粒；4）白色不透明微孔板；5）洗涤液；6）化学发光底物A及B工作液；所述辣根过氧化物酶标记的嗜铬粒蛋白A单克隆抗体是用下述方法制成：①称取CgA单克隆抗体2.0mg，加入1～2ml浓度为0.05mol/L，pH=7.5的碳酸盐缓冲液溶解，4℃储存备用；②称取10.0mg的辣根过氧化物酶，加入1.0ml去离子水，振荡，溶解后，取出0.14～0.28ml，加入0.1mol/L的NaIO4溶液0.2ml，室温下避光反应1～2小时；③将步骤①获得的液体与步骤②的获得的液体混合，室温下避光反应4～8小时；④加入200μl浓度为5mg/ml的NaBH4水溶液,室温下避光反应1～2小时；⑤用0.02M PBS透析12‑24小时，用HPLC二次纯化，收集蛋白峰并于‑20℃下冷冻保存；所述嗜铬粒蛋白A单克隆抗体包被的磁颗粒是用下述方法制成：①取5mL磁颗粒质量含量为2.5%的PBS溶液，用磁板分离弃上清，用去离子水洗磁颗粒；②用0.02mol/L pH=6.2的PBS洗磁颗粒；③用0.02mol/L pH=6.2的PBS调整总体积为5～10ml；④加CgA单抗5mg放在摇床上进行匀化10～20分钟；⑤加入碳二亚胺5～10mg；室温，放在摇床上进行匀化5～10小时；⑥用0.1mol/L pH=7.4的磷酸盐缓冲液洗涤2次；⑦加入Tris和EDTA，使Tris的含量为0.05mol/L，使EDTA的含量为0.004mol/L，调pH=7.5，使抗体浓度为1.0mg/ml，2‑4℃保存；所述洗涤液的配制：取：三羟甲基氨基甲烷6.05g；NaCl8.55g；Tween‑200.5ml；加水至1L；用HCl调pH至7.5±0.1；所述化学发光底物A工作液是用下述方法制成：（1）配制0.05mol/L pH=8.0的Tris‑HCl缓冲液；（2）向1000ml所述步骤（1）配制的Tris‑HCl缓冲液中加入3～5mmol鲁米诺，混匀；所述化学发光底物B工作液是用下述方法制成：（1）配制0.05mol/L pH=8.0的Tris‑HCl缓冲液；（2）向1000ml所述步骤（1）配制的Tris‑HCl缓冲液中加入：0.5～1.0mmol四苯硼钠；1.42mmol铁氰化钾；0.38mmol肉桂酸；7.56mmol过氧化氢，混匀。