| 发明名称 |
一种腈水解酶基因及其原核表达和固定化技术 |
| 摘要 |
本发明涉及一种腈水解酶基因及其原核表达和固定化技术，属于化工酶的原核表达及固定化技术领域。本发明利用PCR技术，以热纤梭菌的基因组为模板克隆到腈水解酶基因，通过大肠杆菌表达系统对该酶进行原核表达，得到含有该腈水解酶基因的重组质粒pET-28a-<i>nit</i>，转化到大肠杆菌BL21获得重组菌BL21(pET-28a-<i>nit</i>)，诱导重组菌表达获得重组腈水解酶；该腈水解酶基因与连接有孢子外衣壳蛋白基因<i>cotG</i>的高拷贝穿梭质粒连接，构建成用于表面展示的重组质粒pHS-<i>cotG</i>-<i>nit</i>，该质粒转入枯草芽孢杆菌菌株DB403获得重组菌DB403(pHS-<i>cotG</i>-<i>nit</i>)，诱导重组菌产生的重组芽孢表面展示有该腈水解酶。本发明首次通过孢子表面展示技术对腈水解酶进行固定化，该方法不仅可以使酶的结构更稳定，而且利于酶在催化后的回收再利用，只需要离心就可以把展示有腈水解酶的孢子回收再利用。 |
| 申请公布号 |
CN103937821A |
申请公布日期 |
2014.07.23 |
| 申请号 |
CN201410162214.9 |
申请日期 |
2014.04.22 |
| 申请人 |
江苏大学 |
发明人 |
陈华友;孙腾云;田瑞;倪忠;陈洪章;陈志;张天喜;郭齐 |
| 分类号 |
C12N15/55(2006.01)I;C12N9/78(2006.01)I;C12N15/70(2006.01)I;C12N1/21(2006.01)I;C12N11/16(2006.01)I;C12R1/19(2006.01)N |
主分类号 |
C12N15/55(2006.01)I |
| 代理机构 |
|
代理人 |
|
| 主权项 |
一种腈水解酶基因，具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。 |
| 地址 |
212013 江苏省镇江市京口区学府路301号 |
