一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法

摘要

本发明属海洋生物技术领域，具体地说是一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法。将星斑川鲽的精液与抗冻液按体积比1:3的比例混合，在0-4℃孵育8-9分钟，孵育后以分段方式降温处理；处理后投入到液氮（-196℃），分装保存。冷冻后精液用自然海水激活，获得复活的冻精活力高于70%。本发明的星斑川鲽精子长期冷冻保存方法对于星斑川鲽人工繁育、种质保存、遗传多样性及可持续养殖等方面有着重要意义。

主权项

一种星斑川鲽精子超低温冷冻保存方法，其特征在于：将星斑川鲽的精液与抗冻液按体积比1:3的比例混合，在0℃孵育6‑8分钟，孵育后以分段方式降温处理；处理后投入到液氮，分装保存；将混合抗冻液和精液的冻存管置于碎冰中轻轻震荡混匀6min，使之充分混匀，然后置于0℃平衡2min；而后以分段降温方式处理，即以‑8℃/min的降温速率降温至‑60℃，然后再以‑15℃/min的降温速率降温至‑120℃平衡2分钟；所述抗冻液由稀释液、抗冻剂和添加剂组成；其中，稀释液为100mM蔗糖，100mM KHCO₃，25mM NaHCO₃；抗冻剂为终浓度8%的DMSO和终浓度7%的Gly；添加剂：5mM还原型谷胱甘肽，50mM牛磺酸，10%蛋黄。