一种HMGB 1修饰的骨组织工程支架材料及其制备方法

摘要

本发明公开了一种HMGB 1修饰的骨组织工程支架材料及其制备方法。以通过静电纺丝技术制作PLLA纳米纤维支架作为基质，利用肝素(2)和交联分子Di-NH₂-PEG将信号分子HMGB1交联到PLLA纳米纤维支架上，得到HMGB1修饰的骨组织工程支架材料。该发明利用一种信号分子实现促细胞招募、侵润和迁移多种功能，具有良好的生物相容性，可复合干细胞也可直接应用于骨组织修复，而且工艺简单可行，可重复性好。

主权项

一种制备HMGB1修饰的骨组织工程支架材料的制备方法，包括下述步骤：1)利用静电纺丝技术制备聚L‑乳酸(Poly L‑lactic acid,PLLA)纳米纤维支架；2)将步骤1)得到的PLLA纳米纤维支架浸泡在70‑75％的乙醇溶液中杀菌，然后使用磷酸盐缓冲液(Phosphate buffered saline,PBS)冲洗3遍，每遍5min，再浸泡于0.01N NaOH中10min以增加表面反应羧基基团；3)用PBS冲洗PLLA纳米纤维支架3遍，每遍5min，再使用蒸馏水冲洗PLLA纳米纤维支架3遍，每遍5min；4)配制20mg/mL1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐(N‑(3‑Dimethylaminopropyl)‑N‑ethylcarbodiimide hydrochloride crystalline,EDC)和10mg/mL N‑羟基硫代琥珀酰亚胺(N‑Hydroxysulfosuccinimide sodium salt,sulfo‑NHS)的溶液备用；5)将PLLA纳米纤维支架浸泡于步骤4)得到的溶液中30min，再用PBS冲洗3遍，每遍5min；6)配制含20mg/mL EDC、10mg/mL sulfo‑NHS和20mg/mL聚乙二醇双胺(Poly(ethylene glycol)bis(amine),Di‑NH₂‑PEG)的溶液备用；7)将PLLA纳米纤维支架浸泡于步骤6)得到的溶液中30min，再用PBS冲洗3遍，每遍5min；8)配制含100mg/mL EDC和50mg/mL sulfo‑NHS的溶液备用；9)配制25mg/mL肝素(2)的溶液备用；10)将步骤8)和步骤9)得到的溶液按照1:4的比例混合，充分混匀，使用1N NaOH将混合溶液的PH调整为7；11)将PLLA纳米纤维支架浸泡于步骤10)得到的溶液中3‑4h，用PBS冲洗3遍，每遍5min；12)配制质量浓度为1％的甘氨酸溶液备用；13)将PLLA纳米纤维支架浸泡于步骤12)得到的溶液中30min，用PBS冲洗3遍，每遍5min；14)配制浓度为100‑1000ng/mL高迁移率族蛋白1(High mobility group box1,HMGB1)溶液备用；15)将PLLA纳米纤维支架浸泡于步骤14)得到的溶液中12h，用PBS冲洗3遍，每遍5min。