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一种预示和鉴定绵羊羊毛长度的分子标记方法，其特征在于它按以下步骤进行：一、采用苯酚/氯仿法从中国美利奴羊的耳组织中提取绵羊基因组DNA，根据绵羊DKK1基因第4外显子区的c.576A＞G位点设计引物DKK1F1和DKK1R1，然后对绵羊基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物，再用内切酶Pvu I酶切PCR扩增产物，获得酶切产物；二、使用浓度为2.5％的琼脂糖凝胶对酶切产物进行电泳分离，然后根据电泳分离结果进行基因型判定，判定的标准：①电泳呈现一条带，大小为119bp，则绵羊DKK1基因第4外显子区c.576A＞G位点未突变，PCR扩增产物不能被内切酶Pvu I酶切，将其命名为AA基因型；②电泳呈现两条带，大小分别为91bp和28bp，则绵羊DKK1基因第4外显子区c.576A＞G位点突变，PCR扩增产物能够被内切酶Pvu I完全切开，将其命名为GG基因型；③电泳呈现三条带，大小为依次为119bp、91bp和28bp，则绵羊DKK1基因第4外显子区c.576A＞G位点处于杂合状态，PCR扩增产物不能被内切酶Pvu I完全切开，将其命名为AG基因型；三、根据中国美利奴羊实验群体的特点，构建基因型效应统计模型：Y＝μ+G+L+A+G×L+G×A+L×A+e，其中Y为性状的观测值，μ为群体均值，G为基因型效应，L为品系效应，A为年龄效应，G×L为基因型和品系的互作效应，G×A为基因型和年龄的互作效应，L×A为品系和年龄的互作效应，e为剩余值效应，然后利用JMP4.0统计软件将基因型效应与羊毛性状进行关联分析，并估计性状的最小二乘均值，关联分析结果表明，绵羊DKK1基因第4外显子区的c.576A＞G位点突变引起的基因型效应与中国美利奴羊实验群体的羊毛长度显著相关，P＝0.0232＜0.05，再进行多重比较，3种基因型中具有GG基因型个体的羊毛长度显著高于AA基因型和AG基因型个体的羊毛长度；四、依据基因型将中国美利奴羊实验群体分为三种类型，组建GG基因型个体为主的羊毛长度性状育种群体，有效培育出长度高的细毛绵羊品系，从而实现对羊毛长度的分子标记辅助育种，即完成预示和鉴定绵羊羊毛长度的分子标记方法；其中步骤一中DKK1F1的核苷酸序列为：5′‑AAGAAGGTACCGTCTGTCTTCGCTCGATC‑3′；DKK1R1的核苷酸序列为：5′‑TGCTTGGTGCACACTTGACCTTCCTT‑3′；步骤二中内切酶Pvu I所识别的碱基序列为CGATCG；步骤三中中国美利奴羊实验群体的特点：①、733只中国美利奴羊为新疆军垦型；②、超细毛品系180只、毛用多胎品系138只、A品系148只、B品系102只、U品系35只和肉用多胎品系130只；③、均为母羊；④、年龄为2～10岁。 |
