一种检测传染病病原体的方法及试剂盒

摘要

本发明公开一种对可能存在于生物样品中的传染病病原体进行检测的方法，所述传染病病原体包括鹦鹉热衣原体、卡氏肺囊虫、钩端螺旋体、Q热立克次体和布鲁氏杆菌，包括：扩增生物样品的核酸片段和用探针进行检测。本发明还提供用于扩增的引物以及用于检测的探针。本发明还提供包含上述引物的试剂盒。本发明所述方法灵敏度高，特异性强，操作简单，样本范围广，可同时检测多种传染病病原体，适用于呼吸道传染病的早期诊断。

主权项

一种非疾病诊断或治疗目的的对可能存在于生物样品中的传染病病原体进行检测的方法，包括：（ⅰ）扩增生物样品的核酸片段，所述核酸片段为鹦鹉热衣原体内涵体膜蛋白A基因的如SEQ ID NO.1所示的核酸片段或其与以下各种核酸片段的组合：卡氏肺囊虫的主要表面糖蛋白基因的如SEQ ID NO.2所示的核酸片段；钩端螺旋体促旋酶B亚单位基因的如SEQ ID NO.3所示的核酸片段；Q热立克次体外膜蛋白基因的如SEQ ID NO.4所示的核酸片段；布鲁氏杆菌外膜蛋白omp2b基因的如SEQ ID NO.5所示的核酸片段；（ⅱ）用探针进行检测，所述探针与步骤（ⅰ）扩增产物中的一种特异性杂交；所述步骤（ⅰ）使用第1组引物用于扩增如SEQ ID NO.1所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示或其与以下各组的组合作为引物进行扩增：第2组引物用于扩增如SEQ ID NO.2所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示；第3组引物用于扩增如SEQ ID NO.3所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示，其下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示；第4组引物用于扩增如SEQ ID NO.4所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示；第5组引物用于扩增如SEQ ID NO.5所示的核酸片段，其上游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示，下游引物核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示；所述步骤（ⅰ）利用NASBA技术扩增样品的核酸片段，NASBA运行条件为41℃～45℃温育90～150分钟；步骤（ⅱ）中所述探针与步骤（ⅰ）所得扩增产物的杂交在固体支持物上进行；所述步骤（ⅱ）使用捕获探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示，所述捕获探针直接或间接的连接在固体支持物上；步骤（ⅱ）中使用以下的核苷酸序列作为检测探针：如SEQ ID NO.8所示，检测如SEQ ID NO.1所示的核酸片段；如SEQ ID NO.11所示，检测如SEQ ID NO.2所示的核酸片段；如SEQ ID NO.14所示，检测如SEQ ID NO.3所示的核酸片段；如SEQ ID NO.17所示，检测如SEQ ID NO.4所示的核酸片段；如SEQ ID NO.20所示，检测如SEQ ID NO.5所示的核酸片段。