一种生产L-丙氨酸的方法

摘要

本发明提供了一种生产L-丙氨酸的方法，涉及基因工程和发酵工程领域，是利用天冬氨酸-β-脱羧酶交联聚集体固相酶生产L-丙氨酸。本发明方法使用PCR方法从德阿昆哈假单胞菌中获得天冬氨酸-β-脱羧酶的编码基因，诱导天冬氨酸-β-脱羧酶的表达，再对其进行化学交联得到天冬氨酸-β-脱羧酶交联聚集体固相酶，以其为酶，以L-天冬氨酸作为底物，生产L-丙氨酸。每升反应液中，L-天冬氨酸底物浓度达1800_g/L，酶促反应20小时后摩尔转化率达99.9%。

主权项

一种生产L‑丙氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）使用PCR方法从德阿昆哈假单胞菌（Pseudomonas dacunhae）中获得天冬氨酸‑β‑脱羧酶的编码基因；（2）PCR产物连接载体、转化大肠杆菌，超声波破碎菌体，收集上清液，再进行分离纯化；（3）用化学交联方法得到天冬氨酸‑β‑脱羧酶交联聚集体固相酶；（4）以磷酸盐缓冲液对步骤（3）获得的酶进行定容，再加入L‑天冬氨酸生产L‑丙氨酸。