一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法

摘要

本发明提供一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法，包括如下步骤：(1)美洲大蠊在冰箱中灭活；之后去除肠道；用75％乙醇清洗风干后置于冰箱保存备用；(2)取适量的冰冻美洲大蠊在液氮中研磨成粉末；(3)丙酮脱脂后，置于冰箱中冷冻，随后在真空冷冻干燥机内冻干成粉末；(4)称取美洲大蠊粉末，加入提取液，离心吸取上清，即为美洲大蠊过敏原提取物；(5)用特异性抗体鉴定美洲大蠊过敏原粗提物中主要过敏原的含量及比例；(6)根据步骤(5)鉴定结果加入酵母菌或昆虫表达的重组蛋白质。本发明方法提取的美洲大蠊过敏原粗提物能最大程度的获得美洲大蠊主要过敏原蛋白，提取物可重复性好，误差小于30％。

主权项

一种美洲大蠊过敏原制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)美洲大蠊在‑80℃冰箱中灭活；在手术显微镜下去除肠道；用75％乙醇清洗、浸泡15分钟，风干后置于‑80℃冰箱保存备用；(2)取适量的冰冻美洲大蠊在液氮中研磨成粉末；(3)丙酮脱脂2次后，置于‑80℃冰箱中冷冻，随后在真空冷冻干燥机内冻干成粉末；(4)称取美洲大蠊粉末1g，加入20L的提取液，在涡旋振荡器上充分混匀，置4℃摇床上抽提0.5小时至4小时，之后在转速为12000g，4℃条件下离心30min，吸取上清，即为美洲大蠊过敏原提取物；(5)用特异性Per a1、Per a2、Per a3、Per a4、Per a6、Per a7、Per a9、Per a10及1‑2种次要过敏原抗体鉴定美洲大蠊过敏原粗提物中主要过敏原Per a1、Per a2、Per a3、Per a4、Per a6、Per a7、Per a9、Per a10及1‑2种次要过敏原的含量及比例；(6)根据步骤(5)鉴定结果加入酵母菌或昆虫表达的重组蛋白质，使其达到美洲大蠊自身的五种主要过敏原含量。