发明名称 |
一种褐色脂肪组织中解偶联蛋白-1分离纯化的方法 |
摘要 |
本发明提供了一种褐色脂肪组织中解偶联蛋白-1分离纯化的方法,通过将试验动物的褐色脂肪组织用提取液A混合研磨,离心去上层脂肪,取一次上清液;将所述一次上清液离心去沉淀,取二次上清液;将二次上清液离心取一次沉淀,将一次沉淀与提取液B混匀,20kHz条件下超声处理,将超声后的溶液离心取二次沉淀;将二次沉淀与提取液B混匀,加入TritonX-100混匀,20kHz条件下超声处理,将超声后的溶液在离心取三次上清液;将三次上清液装柱、洗脱纯化,得到解偶联蛋白-1。本发明的纯化效果较好,成本低,非常适合实验室采用。 |
申请公布号 |
CN103923205A |
申请公布日期 |
2014.07.16 |
申请号 |
CN201410142806.4 |
申请日期 |
2014.04.08 |
申请人 |
云南师范大学 |
发明人 |
朱万龙;王政昆;张浩;高文荣;郑佳;孙舒然 |
分类号 |
C07K14/47(2006.01)I;C07K1/16(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I |
主分类号 |
C07K14/47(2006.01)I |
代理机构 |
北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 |
代理人 |
汤东凤 |
主权项 |
一种褐色脂肪组织中解偶联蛋白‑1分离纯化的方法,其特征在于包括以下步骤:(1)采集试验动物的褐色脂肪组织,将所述褐色脂肪组织与提取液A按质量体积比为1g:5ml混合研磨,在1500g、4℃条件下离心10min,去掉上层脂肪,取一次上清液;将所述一次上清液在500g、4℃条件下离心5min去掉沉淀,取二次上清液;(2)将所述二次上清液在10000g、4℃条件下离心10min,取一次沉淀,将所述一次沉淀与提取液B按质量浓度为1:5混匀,20kHz条件下超声处理,将超声后的溶液在10000g、4℃条件下离心30min,取二次沉淀;(3)将所述二次沉淀与提取液B按质量体积比为1g:2.5ml混匀,加入与步骤(2)所述提取液B等体积的体积浓度为5%的TritonX‑100混匀,20kHz条件下超声处理,将超声后的溶液在10000g、4℃条件下离心30min离心,取三次上清液;(4)将所述三次上清液装柱、洗脱纯化,得到解偶联蛋白‑1;在上述步骤中,所述提取液A的pH7.4,包括10mmol/LTrisbase、250mmol/L蔗糖以及2mmol/LEDTA;所述提取液B的pH6.7,包括20mmol/LMOPS、20mmol/LNa<sub>2</sub>SO<sub>4</sub>以及2mmol/LEDTA。 |
地址 |
650500 云南省昆明市呈贡新区雨花片区1号 |