发明名称 |
一种海马活性糖蛋白的制备方法 |
摘要 |
本发明公开了一种海马活性糖蛋白的制备方法,特点是包括以下步骤:a.将冷冻干燥后的海马粉粹,采用CO<sub>2</sub>超临界流体萃取技术脱除脂肪酸;配置0~0.25mol/L的NaCl浸提液,与脱脂海马按照1:10~1:35(mL/g)的比例混合于锥形瓶中,摇匀后首先进行超声波辅助提取20min,再置于水浴锅中于30℃~80℃下热水浸提1~6h,最后滤纸过滤,上清液即为糖蛋白混合溶液;b.海马糖蛋白的纯化:采取Sevage法和乙醇分级沉淀法。将粗纯品用蒸馏水复溶,3500Da透析袋透析72h脱盐,冷冻干燥,得到海马糖蛋白粗纯品,优点是省时、高效,全程无有毒有害试剂的残留和污染,并确保了制取糖蛋白的活性。 |
申请公布号 |
CN103923201A |
申请公布日期 |
2014.07.16 |
申请号 |
CN201410129587.6 |
申请日期 |
2014.04.01 |
申请人 |
宁波大学 |
发明人 |
徐永健;宿宇婷;姜展志 |
分类号 |
C07K14/435(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C07K1/30(2006.01)I;C07K1/14(2006.01)I;C07K1/34(2006.01)I |
主分类号 |
C07K14/435(2006.01)I |
代理机构 |
宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙) 33226 |
代理人 |
程晓明 |
主权项 |
一种海马活性糖蛋白的制备方法,其特征在于包括以下步骤:(1)海马前处理:将海马洗净冻好后,于‑40℃下冷冻干燥48‑72h,再用粉碎机粉碎,然后采用CO<sub>2</sub>超临界流体萃取技术脱除脂肪酸,得到脱脂海马粉;(2)海马糖蛋白提取:将步骤(1)得到的脱脂海马粉与NaCl浓度为0~0.25mol/L的浸提液按(10~35)g:1mL的比例混合于锥形瓶中摇匀后,首先进行超声波辅助提取20min,再置于水浴锅中于30℃~80℃下浸提1~6h后,用滤纸过滤,得到的上清液即为海马糖蛋白混合溶液;(3)海马糖蛋白粗纯化:将步骤(2)得到的海马糖蛋白溶液减压浓缩至原体积的四分之一,得到糖蛋白样品液,将糖蛋白样品液采用Sevage法除游离蛋白,脱蛋白一次,4℃静置过夜,弃下层游离蛋白层;收集上层糖蛋白溶液,进行乙醇分级沉淀,然后将沉淀收集,将沉淀用丙酮、乙醚各洗涤2次,然后用蒸馏水复溶至8‑12mL,再用3500Da透析袋透析72h脱盐,冷冻干燥,得到海马糖蛋白粗纯品。 |
地址 |
315211 浙江省宁波市江北区风华路818号 |