一种利用超声波制备脱细胞真皮基质的方法

摘要

本发明公开了一种脱细胞真皮基质的制备方法。方法包括对剥离的哺乳动物皮肤进行剔除毛发的处理；用消毒液消毒皮肤，在无菌条件下并用机械法制得网状层真皮；将真皮置于低渗溶液内震荡处理0.5小时-12小时，再置于高渗溶液内震荡处理0.5小时-12小时；重复前步骤1-6次；将真皮置于洗涤剂内用超声波清洗器处理12小时-48小时；用无菌磷酸盐缓冲液洗涤1-6次，环氧乙烷消毒即得脱细胞真皮基质。本发明制备工艺简单实用，细胞去除较为彻底，制作周期短，对周围环境友好，价格较低，适于规模化操作。

主权项

一种利用超声波制备脱细胞真皮基质的方法，包括以下的步骤：（1）、对剥离的哺乳动物皮肤进行剔除毛发的处理；所述哺乳动物皮肤来源自出生不超过 14 天的健康哺乳动物的皮肤；（2）、用 0.1% 苯扎溴铵溶液清洗浸泡后再用消毒液消毒皮肤，在无菌条件下并用机械法制得网状层真皮；（3）、将真皮置于低渗溶液内震荡处理 0.5 小时 ‑ 12 小时，震荡方式为水平或旋转方式，震荡频率为 50 – 200次/分；再置于高渗溶液内震荡处理0.5 小时‑12 小时；所述的低渗溶液是指蒸馏水或者 10 mM Trizma HCl与10 mM EDTA的混合液；所述的高渗溶液是指 1 M NaCl 或者 50 mM Trizma HCl、 1 M NaCl 和 10 mM EDTA 的混合液；（4）、重复步骤（3）1‑6 次；（5）、将真皮置于洗涤剂内用超声波清洗器处理 12 小时‑48 小时；所述的洗涤剂选自 Tween‑20、 Tween‑80、 SDS、 Triton X‑100、 Triton X‑200和CHAPS，其浓度分别为0.1% ‑ 2.5%；超声波清洗器的频率为 20 ‑ 80 kHz，功率为 100 ‑ 400 W；（6）、用无菌磷酸盐缓冲液洗涤1‑ 6次，环氧乙烷消毒即得脱细胞真皮基质。