鉴别和定量口蹄疫双价苗以及多价苗中抗原的血清型的一种方法

摘要

本发明提供了鉴别和定量口蹄疫双价苗以及多价苗中抗原的血清型的一种方法，通过样品处理提取疫苗破乳后水相中口蹄疫病毒RNA，应用荧光定量PCR检测方法来扩增样品中不同血清型的口蹄疫病毒RNA，进行鉴别和定量检测，其中，O型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ ID NO：1~3所示，AsiaI型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ ID NO：4~6所示，A型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ ID NO：7~9所示。本发明的方法具有灵敏性高、稳定性高、特异性好、可以分别准确定量样品中不同型的抗原等特点；具有检测范围广的特点，在100～10¹⁰拷贝范围内具有良好的线性关系，检测范围可以达到10个数量级。

主权项

鉴别和定量口蹄疫双价苗以及多价苗中抗原的血清型的一种方法，其特征在于，通过样品处理提取疫苗破乳后水相中口蹄疫病毒RNA，应用荧光定量PCR检测方法来扩增样品中不同血清型的口蹄疫病毒RNA，进行鉴别和定量检测，其中，O型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ ID NO：1～3所示，AsiaI型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ IDNO：4～6所示，A型口蹄疫病毒引物和探针的序列分别如SEQ ID NO：7～9所示，所有探针5’端标记的荧光基团都为FAM，3’端淬灭基团都为TAMAR，实时荧光定量PCR检测方法为：以所述口蹄疫病毒RNA为模版，在3个PCR反应管中分别加入不同型特异性引物和探针，进行RT‑PCR扩增使用TAKARA公司的一步法RT‑PCR试剂盒。