一种饲用约氏乳杆菌高密度发酵培养基及其应用

摘要

本发明属于乳酸菌培养技术领域，涉及一种饲用约氏乳杆菌高密度发酵培养基及其应用。使用本发明的高密度发酵培养基及其发酵方法发酵的约氏乳杆菌，菌体密度较普通发酵显著提高，活菌数不低于10¹⁰cfu/ml，较普通MRS培养基培养活菌数提高80倍以上，实现了约氏乳杆菌的高密度发酵；本发明的发酵培养基及其应用也减小了生物量的分离费用，缩短生产周期，从而降低生产成本、提高生产效率。

主权项

一种饲用约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)CGMCC No.4926高密度发酵方法，其特征在于，发酵过程如下：(1)将冷冻保存的约氏乳杆菌在MRS琼脂平板活化三次，挑取单菌落接种于深层MRS液体试管，37℃培养10小时后，以1％接种量转接于MRS液体培养基，培养8～10小时后作为种子液；(2)配制高密度发酵培养基，培养基降至所需温度时，接上溶氧电极，标定溶氧为100％；(3)以5％～10％的接种量将步骤(1)所得的种子液接种于步骤(2)的发酵培养基中；(4)发酵，发酵过程中维持发酵液pH值为6～6.5，当pH超过设定值时，补加料液；当pH低于设定值时，自动流加碱性中和剂氨水、KOH、NaOH中的任一种；在温度37～39℃、转速100rpm条件下发酵10～14小时，发酵过程不通气或通入N₂，维持溶氧小于1％；(5)当补加料液pH不再降低或发酵液在600nm波长下的吸光值不再增加时，终止发酵，即得约氏乳杆菌活菌数达10¹⁰cfu/ml以上的发酵液，其中，所述的高密度发酵培养基的主要组分及其含量如下：葡萄糖20～30g/L、胰蛋白胨10～15g/L、牛肉膏或牛肉粉6～15g/L、酵母粉5～10g/L、K₂HPO₄ 2～3g/L、CH₃COONa 5～8g/L、柠檬酸钠2～4g/L、Mg²⁺水溶性化合物0.2～0.4g/L、Fe²⁺水溶性化合物0.1～0.2g/L和Mn²⁺水溶性化合物45～55mg/L，其中，所述料液的主要组分及其含量如下：蔗糖500g/L、蛋白胨150g/L、牛肉粉或牛肉膏150g/L、酵母膏或酵母浸粉75g/L。