牦牛细管冻精制作方法

摘要

本发明属于动物的冻精制作领域，特别是涉及牦牛细管冻精的制作方法。本发明所要解决的技术问题是提供一种牦牛细管冻精制作方法。该方法包括以下步骤：a、配制稀释液；b、采精和检查c、稀释；d、灌装；e、冷冻；f、抽检；g、冷冻贮藏：抽检合格批次的细管冻精移入液氮中贮藏。在本领域采用本发明方法制作牦牛细管冻精，在原精液质量满足要求的情况下，解冻后活率能达0.6以上，用此精液进行人工授精配怀率会更高，可提高所产牦牛质量。

主权项

牦牛细管冻精制作方法，其特征在于：其制作步骤包括：a、配制稀释液；b、采精和检查：采取种公牛的精液，并对精液进行常规检查；要求采集的精液直观检测合格无异状，在35－38℃条件下镜检精子活力达0.7以上者，以及每毫升精液精子数达8亿以上者和畸形率为15％以下才可用于细管冻精；c、稀释：在25～30℃条件下，在待冷冻的精液中加入稀释液并搅拌；所述稀释液分为A液和B液，A液的配方为：每100mL蒸馏水+2.97g柠檬酸钠，然后再每100毫升中加入10mL卵黄得A液；B液的配方为：每41.75mL A液+7mL甘油+2.5g果糖；所述稀释液中加入青毒素至1000单位/毫升，加入链毒素至1000微克/毫升；所述稀释方法为，镜检合格的原精，在25～30℃条件按照1：1的比例加入25～30℃的A液进行稀释，稀释液沿盛原精容器壁缓慢加入，轻轻搅拌；检测精液浓度，再按每细管中的目标精子数和吸管容积，计算出需添加的B液量，并加入盛原精容器，稀释好后用于后继的灌装细管步骤；d、灌装：将精液灌装进冻精细管后，放到冷冻架上，控制温度在0～5℃，持续1～2小时进行平衡；e、冷冻的细管冻精：先使冷冻柜启动后至4℃，停留5分钟；待温度恒定在4℃后将冻精细管移入冷冻箱；从4℃降至‑10℃后停留时间为5分钟，此为精液移入冷冻箱后的过渡平衡期；然后冷冻箱从‑10℃至‑100℃后设定冷冻时间为40分钟；从‑100℃至‑140℃后设定冷冻时间为20分钟；细管结束冷冻进入液氮中保存备用，其液氮中的温度在‑140℃至‑193℃；f、镜检：冷冻结束后，抽检精液活率，解冻抽检活率达到0.6以上移入液氮贮藏罐中冷冻贮藏备用。